HERNANDES, Valéria Pereira​, também é conhecida em citações bibliográficas por: ​PEREIRA, Valéria Rego AlvesAs Leishmanioses são um grupo de doenças tropicais e negligenciadas causadas por protozoários do gênero Leishmania. Além do controle de vetores, dentre as medidas existentes para controlar sua disseminação, estão inclusos o diagnóstico e o tratamento de pacientes, este que é tóxico e possui eficácia variável. Aliado a isso, o uso de uma vacina teria o maior impacto no controle dessas doenças. Em um trabalho prévio de nosso grupo, métodos de imunoinformática utilizados para pesquisar epítopos de células T CD4⁺ e CD8⁺ conservados entre espécies no proteoma predito de Leishmania (Viannia) braziliensis, permitiram identificar e selecionar dez sequências conforme maior afinidade de ligação aos complexos de MHC. A função desses complexos envolve a codificação de proteínas de superfície que reconhecem e apresentam antígenos para o sistema imune adaptativo, sendo importante avaliar moléculas capazes de se ligarem a eles principalmente em um contexto imunoterapêutico ou vacinal. Esses peptídeos foram previamente testados frente a células de indivíduos com Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) e controles (CT), sendo imunogênicos. Para o presente trabalho, designou-se P1 o pool de 5 dos peptídeos capazes de estimular indistintamente, células de indivíduos saudáveis e de pacientes LTA e P2, o pool que estimulou especificamente células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) de pacientes. Eles foram sintetizados (Abm Inc. Richmond- Canadá) e solubilizados de acordo com as instruções do fabricante para serem testados como potenciais candidatos vacinais. Foram realizados ensaios com PBMCs de CT e de pacientes para proliferação celular, imunofenotipagem e dosagem de citocinas, e em paralelo, um ensaio de imunização e infecção com Leishmania amazonensis em camundongos BALB/c. Através do ensaio de CFSE, foi possível observar que houve uma maior proliferação celular nos grupos estimulados com os pools. O ensaio de imunofenotipagem sinalizou que não houve diferença significativa entre os grupos quanto a células CD4⁺ de memória central. Já na população de células efetoras foi possível observar uma maior prevalência dessas células no grupo LTA em relação ao CT. Quando estimuladas com os 2 pools de peptídeos, houve diferença significativa das células CD8⁺ de memória central no grupo LTA em relação ao CT e embora sem diferença significativa com relação às células CD8⁺ de memória efetora, houve um indicativo dessas células serem encontradas em maior número no grupo LTA. Em paralelo, foram quantificados os fatores de transcrição T-bet e ROR-γT. Houve diferença significativa na produção de T-bet tanto por células CD4 como CD8 pelo grupo LTA após os estímulos com ambos os pools testados. Foram ainda observados níveis significativos de ROR-γT em células CD4 do grupo LTA quando estimuladas com P1 e P2; porém, não houve diferença entre grupos nas células CD8. Com relação aos resultados de imunização em camundongos BALB/c, foi encontrada diferença significativa no percentual de células proliferadas nos grupos imunizados com os peptídeos e a molécula adjuvante antes e depois do desafio com Leishmania amazonensis. Sendo assim, os resultados indicam o potencial imunogênico que os grupos de peptídeos testados apresentam, o que dá suporte ao desenvolvimento de uma possível abordagem vacinal.FACEPEThe leishmaniases are a group of neglected tropical diseases caused by protozoan of the genus Leishmania. Besides vector control, amongst the existing measures to decrease its dissemination, the diagnosis and treatment of patients are also included, although they present variable efficacies. Allied to that, the use of a vaccine would have the highest impact to control these diseases. In a previous work of our group, immunoinformatics methods used to search for epitopes of CD4 and CD8 T cells conserved among species on the predicted proteome of Leishmania (Viannia) braziliensis, allowed the identification of ten sequences which had the highest affinity to MHC complexes. The function of these complexes involves the coding of surface proteins which recognize and present antigens to the adaptive imune system, therefore it is an important aspect to be evaluated mainly regarding vaccines and immunotherapy strategies. These peptides were previously tested using cells from patients with American Tegumentary Leishmaniasis (ATL) and healthy individuals being characterized as immunogenic. Thus, for the present work, we have designated P1 as the pool of 5 peptides which could indistinctly stimulate cells from patients and healthy individuals, and P2 the pool of the other 5 peptides which specifically stimulated peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) of ATL patients. They were synthesized commercially (Abm Inc. RichmondCanada) and solubilized according to the manufacturer’s instructions to be tested as potential vaccine candidates. Proliferation and immunophenotyping assays, as well as cytokine production was assessed using PBMCs from patients (ATL) and healthy individuals (CT), and, in parallel, an immunization and challenge assay using Leishmania amazonensis in BALB/c mice was performed. It was possible to observe on the CFSE assay that there was a higher proliferation after stimulation with both peptide pools. The immunophenotyping assay did not show significant diferences between groups regarding the levels of central memory CD4 T cells. For effector memory CD4 T cells, it was possible to observe a higher number on the ATL group compared to the CT. When the PBMCs were stimulated with the 2 peptide pools, there was a significant increase in central memory CD8 T cells from the ATL group and although without statistical significance, it was possible to observe an increase on effector memory CD8 levels on the ATL group. In parallel, the transcription factors T-bet and ROR-γT were quantified. There was a significant difference on T-bet expressing cells for both CD4 and CD8 from the ATL group after stimuli with the peptide pools. It was also observed significant levels of ROR-γT in CD4 T cells from the ATL group after stimuli with P1 and P2; however, there was no difference between groups for CD8 T cells. Regarding the assays in BALB/c mice, it was observed significant differences on the percentual of proliferated cells after immunization with the pool of peptides and an adjuvant molecule before and after challenge with Leishmania amazonensis. Therefore, the results indicate an immunogenic profile of the peptide pools, which supports the development of a potential vaccine.