masterThesis
Avaliação do perfil de estabilidade do terconazol e caracterização de seus produtos de degradação
Autor
SILVA, José Wellithom Viturino da
Institución
Resumen
O terconazol (TCZ) é um antifúngico do grupo dos triazóis e é utilizado no tratamento da vulvovaginite fúngica de forma bastante eficaz. Por outro lado, a produção de medicamentos exige a realização de estudos que garantam o uso seguro e eficaz, dentre estes, os estudos de degradação forçada têm grande destaque. Este trabalho teve como objetivo realizar um estudo de degradação forçada do TCZ, com a finalidade de desenvolver um MIE por CLAE-DAD e caracterizar seus produtos de degradação. Foram seguidas as diretrizes trazidas pela ICH para as condições de estresse ácido, básico, oxidativo, fotolítico, alta temperatura e umidade. Além disso, foram realizados estudos de cinética de decaimento para as condições em que o TCZ mostrou-se susceptível a degradação. A elucidação estrutural foi realizada com o auxílio do sistema LC-MS/TOF. O método cromatográfico desenvolvido foi composto por coluna Gemini NX (150 x 4,6 mm), temperatura ambiente, fase móvel acetato de amônio (pH= 8 ± 0,5):Metanol (25:75 v/v), fluxo de 1 mL.min⁻¹ no modo isocrático e volume de injeção de 20 μL. As amostras de mostraram-se estáveis nas condições de estresse ácido, básico, fotolítico, alta temperatura e alta umidade. Para o estresse oxidativo com H₂O₂ 3% e 1,5%, foi observado um decaimento de 42,29% e 39,43%, respectivamente, e formação de dois produtos de degradação (PDs 1 e 2). O estresse fotolítico em solução levou a uma degradação de 37,17% do teor do TCZ em apenas 10 min e a formação de 4 produtos de degradação (PDs 3, 4, 5 e 6). O acoplamento do sistema LC-MS foi realizado através da ionização por electrospray em modo positivo, onde foi possível observar o sinal 532,1872 m/z [M+ H]⁺ como pico base do TCZ. Para o PD1 e PD2 foi observada a presença de íons moleculares 564.1788 m/z [M+ H]⁺ e 548.1845 m/z [M+ H]⁺, o que nos sugere a adição de dois e um átomos de oxigênio, respectivamente, na estrutura do TCZ, com uma provável formação de N-óxidos. Para os PD3 e 4, foi possível observar um perfil de massas semelhante de 498.2265 m/z [M+ H]⁺, o que nos leva a deduzir que estes produtos de degradação são formados pela perda de um átomo de cloro da molécula do TCZ nas posições orto e para. O PD5 evidenciou perfil de massas de 464.2648 m/z [M+ H]⁺, sem apresentar padrão isotópico para átomos de cloro, o que nos leva a concluir que este produto de degradação é formado pela perda dos dois átomos de cloro da porção fenílica do TCZ. Já o PD6 apresentou perfil de massas de 496.2108 m/z [M+ H]⁺ e seu mecanismo de formação parece estar ligado ao ataque do grupo triazol ao radical arila. A partir deste estudo de degradação forçada foi possível conhecer melhor os aspectos envolvidos na estabilidade do TCZ e obtiveram-se informações estruturais de seus produtos de degradação o que nos dá suporte para prever e avaliar instabilidades em medicamentos a base deste fármaco. CAPES Terconazole (TCZ) is an antifungal of the triazoles group and has been used in the treatment of fungal vulvovaginitis quite effectively. However, for its manufacturing, it is necessary to carry out studies that ensure its safe and effective use. Among these, forced degradation studies had been great significance. The aim of this work was to study the TCZe forced degradation, to develop a stability indicating method by HPLC-DAD and characterizing its degradation products. Forced degradation tests were performed according to ICH guidelines, forced conditions under acid, basic, oxidative, photolytic, thermal and humidity. In addition, TCZ forced degradation kinetics studies have been performed for situations that it is shown your degradation. Structural elucidation was performed using LC-MS/TOF. The chromatographic method developed was performed using Gemine NX (150 x 4.6 mm) at room temperature, mobile phase was ammonium acetate (pH= 8 ± 0,5) and methanol (25:75 v / v) at a flow of 1 mL.min⁻¹ in a isocratic elution and injection volume of 20 μL. The samples were stable under acid, basic, photolytic, thermal and humidity conditions. However, under oxidative stress with 3% and 1.5% H₂O₂, a decrease of 42.29% and 39.43%, respectively, and a generation of two degradation products (DPs 1 and 2) were observed. As well, the photolytic stress in solution led to a TCZ degradation of 37.17% in 10 minutes and the generation of 4 degradation products (DPs 3, 4, 5 and 6). HPLC-MS coupling was performed by electrospray ionization on a positive mode, where it was possible to obtain the signal of m / z 532.1872 [M + H] + as the base peak of TCZe. For DP 1 and DP2, the presence of m / z 564.1788 [M + H] + and m / z 548.1845 [M + H] + was observed, these find suggest the addition of two and one oxygen atoms, respectively, on TCZe structure, with a probable generation of N-oxides. For DPs 3 and 4, a similar mass profile of m / z 498.2265 [M + H] + was found, which leads us to deduce that these degradation products are formed by the loss of one chlorine atom of the TCZe molecule in the ortho and para positions. The DP 5 showed the mass profile of m / z 464.2648 [M + H] +, without the presence of standard isotope for chlorine atoms, which leads us to conclude that the degradation product is formed by losses of two chlorine atoms of phenyl portion of the TCZe. The DP6 mass profile of m / z 496.2108 [M + H] + and its formation mechanism seems to be associated with the attack of triazole group on aryl radical. From this, the forced degradation study allowed to know the TCZe stability issues and to know the structures of its degradation products. The knowledge generated here can help to predict instability in medicines based on this drug.