Tesis
Produção e purificação do peptídeo hemopressina visando potencial farmacológico
Fecha
2018-08-03Registro en:
OLIVEIRA, Daiane Medeiros de. Produção e purificação do peptídeo hemopressina visando potencial farmacológico. 2018. xii, 47 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Farmacêuticas)—Universidade de Brasília, Brasília, 2018.
Autor
Oliveira, Daiane Medeiros de
Institución
Resumen
A hemopressina é um nonapeptídeo derivado da cadeia α-1 de hemoglobina de
mamíferos que é conhecido pelos seus efeitos hipotensivo, analgésico e supressor do
apetite. Este peptídeo age como um agonista inverso ou antagonista do receptor
canabinoide CB1. Disfunções no sistema endocanabinoide, estão associadas com
algumas patologias e morbidade, tais como obesidade, dor neuropática, depressão,
inflamação, mal de Alzheimer e doença de Parkinson. O presente estudo teve por
objetivo produzir a hemopressina nas formas sintética e recombinante, e purificar as
moléculas produzidas, visando futura avaliação das suas propriedades biológicas. Para a
obtenção do peptídeo recombinante, a sequência nucleotídica que codifica a
hemopressina foi inserida no vetor de expressão pGEX-4T-1® (GE Healthcare)
fusionada ao tag-GST e expressa em Escherichia coli BL21-CodonPlus. Várias
condições de expressão foram testadas para determinar os melhores parâmetros de
expressão. A síntese em fase sólida da hemopressina de formas humana e murina foi
realizada utilizando a estratégia Fmoc/tButil. As sequências de resíduos de aminoácidos
de ambas as formas da hemopressina foram confirmadas por espectrometria de massa
MALDI no modo LIFTTM em um equipamento de Autoflex Speed (BrukerDaltonics,
Bilerica, EUA). A purificação do peptídeo sintético foi realizada por cromatografia de
fase reversa (Shimadzu LC-20AT) numa coluna C18 semi-preparativa (Jupiter 5 μm
300 Å). Análises por espectrometria de massa das hemopressinas humana e murina
mostraram peptídeos sintéticos com massa molecular de 1.053,6 Da e 1.087,6 Da,
respectivamente. A massa molecular da hemopressina recombinante de murino
fusionada à GST foi de aproximadamente 31 kDa, obtida por meio de análise de SDSPAGE
e confirmada por Western Blotting. O rendimento da expressão foi avaliado por
densitometria, que constatou a produção de 147,8 mg/L da proteína recombinante.