Identificação, isolamento e caracterização de fosfolipases A2 oriundas da secreção cutânea de Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsius

Abstract

O presente trabalho relata a caracterização estrutural e funcional de fosfolipases A2 (PLA2s) presentes na secreção cutânea dos anuros Pithecopus azureus e Phyllomedusa tarsius. Em P. azureus, uma fosfolipase N-glicosilada, denominada Pa-PLA2, foi isolada e sua estrutura primária madura completamente sequenciada. A Pa-PLA2 é composta por 128 resíduos de aminoácidos, cuja estrutura apresenta sete ligações dissulfeto e dois sítios N-glicosilados (Asn 67 e Asn 108). As formas glicosilada e deglicosilada da Pa-PLA2 foram avaliadas qualitativamente e mostraram-se funcionalmente catalíticas. O modelo molecular tridimensional da Pa-PLA2 indica que os motivos de glicanos observados estão localizados longe do sítio ativo da enzima e, portanto, é possível que exerçam pouco ou nenhum papel significativo na interação direta do sítio catalítico da Pa-PLA2 e seus substratos. Em P. tarsius, foram isoladas nove frações da secreção cutânea com atividade fosfolipásica e duas sequências aminoacídicas foram obtidas a partir do sequenciamento do cDNA desta espécie. Ambas as sequências, denominadas Pht-PLA2-01 e Pht-PLA2-02, contêm, respectivamente, 127 e 128 resíduos de aminoácidos e um sítio putativo de N-glicosilação (Asn 108). A massa molecular teórica da Pht-PLA2-01 N-glicosilada com o motivo de glicano GlcNAc2Man3 foi encontrada em uma das nove frações onde foram detectadas atividade fosfolipásica. A distribuição da Pht-PLA2-01 no tecido epitelial foi avaliada por imageamento do tecido pela técnica de MALDI-imaging, comprovando a real existência dessas moléculas no tecido de onde foram isoladas.