Estudo da proteína centrina5 de Trypanosoma cruzi

Abstract

O Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da Doença de Chagas, zoonose endêmica das Américas do Sul e Central. É um parasito da ordem Kinetoplastidea, família Trypanosomatidae caracterizado pelo DNA mitocondrial cinetoplasto (kDNA). Atualmente estima-se que 8 milhões de pessoas estão infectadas com T. cruzi no mundo das quais 4,6 milhões no Brasil. As proteínas centrinas foram descritas inicialmente como componentes dos centros organizadores de microtúbulos em eucariotos. São proteínas da família EF-Hand composto por dois pares de hélice-alça-hélice, motivo de ligação ao Ca2+. Ao se ligar ao Ca2+, essas proteínas mudam de conformação conferindo mobilidade ao sistema. Em cinetolplastídeos foram descritas cinco centrinas (CEN1 - CEN5) que se relacionam com a duplicação de organelas e citocinese, sendo que a CEN5 foi identificada apenas nesse grupo de organismos e ainda é muito pouco estudada. A centrina5 em T. cruzi possui a expressão de mRNA relativamente alta em todas as principais fases de vida. Esse trabalho teve como objetivo o estudo da proteína centrina5 de T. cruzi. A partir da sequência de aminoácidos predita para essa proteína, realizamos

análises in silico. O estudo das famílias proteicas da TcCEN5 previu dois domínios EF- hand, responsáveis pela ligação ao Ca2+. A modelagem tridimensional da proteína previu

uma estrutura com a pontuação de GMQE igual a 0,64. Os estudos filogenéticos relacionaram a TcCEN1 e TcCEN3 à TcCEN5; assim possivelmente, essas proteínas possuem funções análogas. Para o estudo da função, silenciamento gênico foi realizado através do sistema CRISPR/Cas9. Para tal, parasitos modificados de T. cruzi, que expressam a Cas9, foram utilizados em conjunto a RNAs guia (sgRNA) com o objetivo de induzir mutação gênica no gene TcCEN5 introduzindo códons de parada precoce. Os sgRNAs desenvolvidos e utilizados nesse trabalho foram eficientes para gerar o silenciamento gênico, entretanto, não houve detecção de mudança na morfologia do parasito. Estudos posteriores são necessários a fim de estabelecer uma função para essa proteína dentro da fisiologia do T. cruzi.