Caracterização morfológica e bioquímica da Fibrina C leucoplaquetária autóloga : perspectivas na aplicação clínica

Abstract

Os concentrados sanguíneos (CS), tanto a forma líquida anticoagulada de plasma rico em plaquetas (PRP) como a forma polimérica de fibrina rica em plaquetas (PRF) são preparações terapêuticas autólogas não-transfusionais com propriedades biológicas aplicáveis na regeneração tecidual. Esses CS diferem na forma de preparo, na arquitetura da rede de fibrina, na liberação dos fatores de crescimento e no conteúdo de plaquetas e células. Considerando que as alterações metodológicas podem resultar em matrizes distintas e possíveis comprometimentos de sua eficácia clínica, este trabalho avaliou a influência de variações na força g, tempo de rotação, ângulo do rotor e tipos de tubos sobre o conteúdo celular, organização morfológica, tempo de fibrinólise e liberação do vascular endotelial growth fator (VEGF) em matrizes sanguíneas experimentais. Amostras de sangue humano foram utilizadas para obter matrizes experimentais de PRF e plasma sanguíneo em três modelos de centrífugas com distintos rotores de ângulo 80-2B (45o), EBA200 (33o) e FibrinFuge25 (25o); três forças g (200, 400 e 800 por 10 minutos); três tipos de tubos (tubos de plasma EDTA, vidro puro e plástico com SiO2). A contagem de células e plaquetas foi realizada por citometria de fluxo, utilizando um contador hematológico automático; As análises morfológicas dos espécimes experimentais de PRF foram realizadas por macroscopia (MA), microscopia óptica (LM), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM). A análise de VEGF foi realizada por Cytometric Bead Array (CBA), um imunoensaio quantitativo. Os resultados da contagem de plaquetas em amostras experimentais de plasma mostraram que as maiores concentrações na fração sobrenadante foram obtidas com 200 x g e com forças de 400 a 800 x g somente na zona de buffy coat. A análise macroscópica das matrizes de PRF apresentou membranas maiores e aumento da área de buffy coat com a utilização do ângulo reduzido. A análise por microscopia de luz apresentou um conteúdo mais dispersivo de plaquetas no corpo das matrizes com a redução do ângulo do rotor combinado à baixa força de g, bem como diferenças no aumento das concentrações de plaquetas no buffy coat (800 xg) e no corpo da matriz (200 xg). A análise por microscopia eletrônica de varredura reafirmou os achados da microscopia óptica a partir de cortes transversais do coágulo de PRF. Os aumentos de 20 a 40.000x esclareceram a ultraestrutura tridimensional da matriz de PRF, durante a fibrinólise, permitiu a visualização de fragmentos de óxido de silício utilizados como ativador de coágulo em tubos de plástico e a presença de eritrócitos poliédricos na porção terminal da PRF. As maiores concentrações de VEGF foram observadas nas matrizes obtidas em tubos de vidro submetidos às menores faixas de força g. Os resultados desse estudo elucidaram a estrutura da matriz de fibrina, a dispersão dos elementos figurados do sangue ao longo da matriz e a variação morfológica sofrida pela fibrina durante o processo de fibrinólise, e no conjunto, esses resultados contribuirão para o entendimento dos efeitos dos diferentes parâmetros na forma e nos elementos que compõem a matriz de PRF.