Identificação polifásica e variabilidade de isolados de Meloidogyne spp.

Abstract

As espécies de Meloidogyne (Nematoide das Galhas NG) são responsáveis por muitos danos na agricultura em todo o mundo. Apesar de sua ampla distribuição mundial, as epidemias causadas pelos NGs são mais intensas nas regiões tropicais. Meloidogyne incognita, M. javanica e M. arenaria, o grupo M. incognita ou grupo MIG, estão amplamente distribuídas nessa região e causam danos em uma elevada gama de hospedeiros. As principais limitações para o controle eficiente dessas espécies são: (i) a dificuldade de identificação das espécies em campo e (ii) a falta de conhecimento sobre a variabilidade genética destas espécies. Por isso, este estudo teve como objetivo identificar, por meio de uma abordagem polifásica, as espécies de Meloidogyne predominantes nos campos de cultivo de soja na região Centro-Oeste do Brasil, bem como estudar a variabilidade genética de isolados de M. incognita. Além disso, avaliou-se a possibilidade de identificação das espécies do grupo MIG por espectrometria de massa do tipo MALDI-TOF (matriz assistida por dessorção e ionização por tempo de voo, do inglês matrix-assisted dessortion/ionization time-of-flight). A coleta foi realizada em 49 campos de soja com o histórico da ocorrência de espécies de Meloidogyne, localizados em cinco municípios do estado de Mato Grosso (MT) e 10 de Goiás (GO). A identificação dos isolados foi realizada com marcadores moleculares do tipo Sequence Characterized Amplified Regions (SCAR)-PCR, perfil isoenzimático de esterase e sequenciamento da região mitocondrial citocromo oxidase I (COI) e NADH desidrogenase subunidade 5 (NADH5). A presença de isolados de Meloidogyne foi detectada em 18 amostras. Meloidogyne incognita, M. javanica e M. enterolobii foram detectadas e observou-se a presença de populações mistas em 50% das amostras. A análise filogenética do gene NADH5 apresentou resolução suficiente para separar os isolados de M. javanica e M. incógnita a nível de espécie. A análise da variabilidade de M. incognita indica tratar-se de uma população clonal com um reduzido número de haplótipos e com baixa diversidade haplotípica e nucleotídica. Este estudo demonstrou que M. incognita é a principal espécie encontrada na cultura da soja, podendo ocorrer em associação com M. javanica e/ou M. enterolobii. A avaliação do uso da espectrometria do tipo MALDI-TOF para a identificação taxonômica dos fitonematoides do grupo MIG foi realizada com 18 isolados de M. incognita, 20 isolados de M. javanica e cinco isolados de M. arenaria. Os isolados foram identificados previamente por perfil de esterase e os espectros foram obtidos de proteínas extraídas de cinco fêmeas maceradas em solução de acetonitrila: água Milli Q (50:50). A ionização das proteínas foi realizada em matriz de αciano-4-hidroxicinâmica (CHCA). Após a geração de dendrograma, observou-se que a técnica MALDI-TOF MS tem sensibilidade para separar isolados de M. javanica, M. incognita e M. arenaria em grupos distintos, o que possibilita seu uso para a identificação das espécies do grupo MIG.