Vigilancia ambiental de cepas de poliovirus en municipios considerados con potencial de riesgo para reintroducción de estos virus en la comunidad

Abstract

Abstract The polio virus is an important pathogen that is transmitted through the fecal-oral route. The epidemiology of the infection is directly related to the access of the population to drinking water and to the sewage infrastructure, therefore epidemiological surveillance programs allow to maintain high standards of health safety in vulnerable populations. In this way, the impact on public health caused by the passage of irregular immigrants in local communities can be evaluated, as well as generating the development of contingency, sanitation and humanitarian support plans for people from countries where polio continues to be of a character endemic. In the present study, an environmental surveillance of poliovirus was carried out in three municipalities of Colombia: Cali, Turbo, Cúcuta, with high risk of transmission by flow of irregular migrants. Three serial samplings were carried out in the municipalities of Turbo, Cali and Cúcuta, from April to November of the year 2017, taken as the main discharge of wastewater from each municipality. The samples were transported to the Center for Biomedical Research of the University of Quindío and were concentrated using the "two phase" method, recommended by the World Health Organization (WHO). Then we proceeded to the viral isolation in RD and L20B cell lines, according to the WHO standard for reference laboratories. The samples that showed cytopathic effect (ECP) in both RD and L20B cells were extracted RNA, and then proceeded to the identification of the isolates, by means of an RT-PCR, using three sets of primers: EV, Pan PV, in addition to Sabin 1 and 3. Finally the product of the RT-PCR was verified, it was observed in a 2% agarose gel, and photographic record of the findings was left. In the results, four samples of wastewater were identified with the presence of bands with the expected size (114 bp) for enterovirus (EV) by RT-PCR; both the RD and L20B cell lines were able to isolate non-polio EV (EVNP). The processes of concentration, isolation and, finally, of intratypical differentiation were developed satisfactorily, since the presence of VOPb (Sabin 1 and 3) was identified during all the processes. The investigation allowed detecting the presence of EVNP in the residual water samples of the municipalities under study. No presence of poliovirus derived from the vaccine or wild poliovirus was found. As a recommendation, it is important that the surveillance system be active and maintain the sensitivity and high level of quality required by WHO, given the possibility of importing wild polioviruses or vaccine derivatives from endemic countries or with little control in their health programs.

El virus de la polio es un importante patógeno que se transmite por vía fecal-oral. La epidemiología de la infección está directamente relacionada con el acceso de la población al agua potable y con la infraestructura de alcantarillado, por lo tanto los programas de vigilancia epidemiológica permiten mantener altos estándares de seguridad en salud en de las poblaciones vulnerables. De esta forma se puede evaluar el impacto en salud pública producido por el paso de inmigrantes irregulares en las comunidades locales, además de generar el desarrollo de planes de contingencia, saneamiento y apoyo humanitario a las personas provenientes de países donde la poliomielitis continúa siendo de carácter endémico en tres municipios de Colombia: Cali, Turbo, Cúcuta, con alto riesgo de transmisión por flujo de migrantes irregulares. Se llevaron a cabo tres muestreos seriados de abril a noviembre del año 2017, tomados en el principal vertimiento de aguas residuales de cada municipio. Las muestras fueron transportadas al Centro de Investigaciones Biomédicas de la Universidad del Quindío y se concentraron empleando el método de “dos fases”, recomendado por la Organización Mundial de la Salud (OMS). Luego se procedió al aislamiento viral en líneas celulares RD y L20B, según el estándar de la OMS para laboratorios de referencia. A las muestras que presentaron efecto citopático (ECP) tanto en células RD como L20B se les hizo extracción de ARN, y posteriormente se procedió a la identificación de los aislamientos, por medio de una RT–PCR, usando tres juegos de iniciadores: EV, Pan PV, además de Sabin 1 y 3. Finalmente se verificó el producto de la RT-PCR, se observó en un gel de agarosa al 2 %, y se dejó registro fotográfico de los hallazgos. En los resultados se identificaron cuatro muestras de aguas residuales con la presencia de bandas con la talla esperada (114 pb) para enterovirus (EV) por RT-PCR; tanto las líneas celulares RD como L20B fueron capaces de aislar EV no polio (EVNP). Los procesos de concentración, aislamiento y, por último, de diferenciación intratípica se desarrollaron de forma satisfactoria, ya que se identificó la presencia de VOPb (Sabin 1 y 3) durante todos los procesos. La investigación permitió detectar la presencia de EVNP en las muestras de agua residual de los municipios en estudio. No se encontró presencia de poliovirus derivado de la vacuna o poliovirus salvaje. Como recomendación, se indica la importancia de que el sistema de vigilancia se encuentre activo y mantenga la sensibilidad y el elevado nivel de calidad exigido por la OMS, ante la posibilidad de la importación de poliovirus salvajes o derivados de la vacuna procedentes de países endémicos o con escaso control en sus programas de salud.