Trabajo de grado - Pregrado
Evaluación del Efecto Inhibitorio de la Comunicación Celular de Pectobacterium Carotovorum Generado por el Aislado Stenotrophomonas Sp-HSL25
Autor
Escalante-Valek, Mariana
Institución
Resumen
Las acíl homoserina acilasas son enzimas que integran la superfamilia de las nucleófilo N-terminal (Ntn) hidrolasas, que intervienen en la degradación de señales inductoras tipo acíl homoserina lactona (AHL), su actividad permite detener la comunicación celular (QS). A través de un proyecto de bioprospección realizado en el año 2009 por el grupo de investigación BioMol, se obtuvo el aislado HSL25, identificado como Stenotrophomonas sp por medio de PCR y secuenciación molecular, donde se encontró el gen que codifica a una proteína tipo acilasa atípica, perteneciente a la familia penicilin acilasa; por esta razón, se planteó como objetivo principal evaluar la actividad inhibitoria de Quórum Sensing de la acilasa HSL-25 frente a Pectobacterium carotovorum en modelos de Solanum tuberosum.
Anteriormente, Stenotrophomonas sp - HSL25 demostró aprovechar como fuente nutricional diferentes señales AHL, por ello, se efectuaron ensayos para determinar su actividad acilasa utilizando la cepa biosensor Chromobacterium violaceum (CV026) frente a las señales N-butiril-L- homoserina lactona (C4 -AHL), N-hexanoil-L-homoserina lactona (C6- HSL), N-3-oxohexanoil-L-homoserina lactona (3-oxo-C8-HSL), la N- octanoil-L-homoserina lactona (C8-HSL) y N- dodecil homoserina lactona (C12- AHL) sintéticas; adicionalmente y con el fin de asegurar que la actividad se debe únicamente a la acción de la proteína HSL25, se construyó una cepa recombinante que portara el gen descrito para la acilasa.
Las cepas nativa y recombinante mostraron alta actividad en la utilización de las señales con cadena acíl lateral corta (C4 Y C6 AHL), a su vez, la suspensión extracelular de HSL25 produjo un efecto completamente inhibitorio sobre la infección causada por Pectobacterium caratovorum que origina la podredumbre blanda de la papa. Acyl homoserine acylases are enzymes that make up the superfamily of nucleophilic N-terminal (Ntn) hydrolases, which are involved in the degradation of inductive signals like acyl homoserine lactone (AHL), their activity quench cell to cell communication (QS). Through a bioprospecting project carried out in 2009 by the BioMol research group, isolate HSL25 was obtained, identified as Stenotrophomonas sp by means of PCR and molecular sequencing, where the gene that encodes an atypical acylase-type protein was found. belonging to the penicillin acylase family; Therefore, the main objective was to evaluate the inhibitory activity of Quorum Sensing of the HSL-25 acylase against Pectobacterium carotovorum in Solanum tuberosum models.
Previously, Stenotrophomonas sp - HSL25 used different AHL signals as a nutritional source, hence, were intended to determine their acylase activity using the biosensor strain Chromobacterium violaceum (CV026) against N-butyryl-L- homoserine lactone (C4 - AHL), N-hexanoyl-L-homoserine lactone (C6-HSL), N-3-oxohexanoyl-L-homoserine lactone (3-oxo-C8-HSL), N-octanoyl-L-homoserine lactone (C8-HSL) and N-dodecyl homoserine lactone (C12-AHL); In addition, to ensure that the activity is solely due to the action of the HSL25 protein, a recombinant strain carrying the gene described for the acylase was constructed.
The native and recombinant strains showed high activity degrading signals with a short acyl side chain (C4 and C6 AHL), in turn, the extracellular suspension of HSL25 produced a completely inhibitory effect on the infection caused by Pectobacterium carotovorum that originates the potato soft rot.