Estandarización y estudio preliminar de valores de referencia de Arilsulfatasa A en muestras de sangre en papel filtro

Abstract

La Arilsulfatasa A (ASA) es una sulfatasa lisosomal encargada del catabolismo del sulfatido, este es uno de los esfingolípidos principales de la mielina y se encuentra en grandes proporciones en los oligodendrocitos y las células de Schwann. La deficiencia de la ASA ocasiona la acumulación intralisosomal del sulfatido, lo que se desencadena una respuesta inflamatoria y la muerte celular dando lugar a la Leucodistrofia Metacromática. Esta enfermedad es neurodegenerativa y no tiene cura hasta el momento, aunque algunos tratamientos experimentales con terapia génica y terapia génica celular han resultado exitosos. El diagnóstico se realiza a partir de imágenes de resonancia magnética, que detectan demielinación y daño celular; pruebas genéticas que detectan las mutaciones responsables de la deficiencia enzimática; y pruebas bioquímicas que detectan un aumento en los niveles del sulfatido en orina o deficiencia de la actividad enzimática de ASA en suero, leucocitos y fibroblastos. Una prueba bioquímica reciente para realizar tamizajes poblacionales es técnica DBS (Dried Blood Spots), que no requiere cadena de frío y utiliza una menor cantidad de muestra y reactivos que las pruebas bioquímicas tradicionales. En este proyecto se logró estandarizar un protocolo de detección de la actividad enzimática de ASA con un sustrato fluorescente y posteriormente se estableció un rango preliminar de referencia en individuos sanos para población colombiana, a partir de los datos de 87 controles sanos y un individuo afectado con la enfermedad.

Arylsulfatase A (ASA) is a lysosomal sulfatase involved in sulfatide catabolism. Sulfatide is a sphingolipid which is one of the main components of myelin, it is found mostly in oligodendrocytes and Schwann cells. ASA deficiency causes intralysosomal sulfatide accumulation which triggers inflammatory response and cell death resulting in the development of Metachromatic Leukodystrophy. There is not a precise cure for the decease nowadays, nevertheless some experimental gene therapy and gene cell therapy have shown promising successful results. Diagnostic is based in magnetic resonance images, which precisely show demyelination and brain damage; genetics tests which detect the mutations responsible for the enzymatic deficiency; and biochemical methods which detect increased sulfatide levels in urine or enzymatic activity deficiency in serum, blood, or fibroblasts. A recent biochemical test used for selective screening in a large number of samples is the technique DBS (Dried Blood Spots); this technique needs no cold chain and it requires less amount of sample and reactives than traditional biochemical tests. This project successfully detected ASA enzymatic activity in DBS samples with a fluorescent substrate, after that a preliminary range was stablished for the enzymatic activity value in healthy controls for colombian population, the data was obtained from 87 healthy individuals and one patient.