ARDRA para la identificación de las bacterias coliformes Citrobacter sedlakii y Citrobacter gilleni, del humedal “Laguna de Tierra Blanca” Soacha, Cundinamarca

Abstract

Muestras de agua del humedal “Laguna de Tierra Blanca” de Soacha, Cundinamarca, fueron sembradas en agar MacConkey y EMB. Una colonia verde metálico, catalasa positiva y oxidasa negativa se resembró de nuevo en agar EMB y fue sometida a la prueba bioquímica API E20. Se extrajo el DNA, se amplificó el gen 16S rRNA por PCR y se cortó con las endonucleasas de restricción AluI y HpyCH4III. Un análisis de ARDRA in silico fue realizado para 11 secuencias del gen 16S rRNA de todas las especies del género, reportadas en GenBank. El sistema API E20 reveló la presencia de Citrobacter sp. El análisis de ARDRA mostró que el patrón de bandas generado por HpyCH4III no presentó ninguna coincidencia con los reportados en GenBank. AluI presentó seis bandas con tamaños de 592, 338, 368, 227, 95, 92 y 49 pb, coincidiendo con las bandas in silico reportadas para las especies Citrobacter sedlakii y Citrobacter gillenii, presentándose para cada especie bacteriana una banda adicional. La banda de 367 pb identificó a C. gillenii y la de 338 pb a.C. sedlakii, concluyéndose que la colonia aislada contenía posiblemente estas dos cepas bacterianas.