Estandarización de primers para evaluar genes housekeeping de la línea 3T3-L1

Abstract

La obesidad es una enfermedad multifactorial, altamente compleja y su prevalencia ha venido en aumento en los últimos años. Una manera de contribuir al conocimiento en esta área es por medio de la evaluación de la expresión génica, y las técnicas de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), PCR con Transcriptasa Inversa (RT-PCR) y PCR en tiempo real (qPCR), son los métodos más confiables y utilizados. A pesar de que existen múltiples reportes de genes housekeeping para la línea 3T3-L1, aún se encuentran deficiencias en los diseños de los primers, y esto puede generar resultados poco confiables. Es así como, en este estudio se evaluó la eficacia de una pareja de primers (uno reportado en la literatura y otro diseñado por el autor) para Beta Actina (ACTB), Gliceraldehído 3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH) y ARN ribosomal 18s (RNA 18s) en la línea 3T3-L1, con el fin de estandarizar su uso para posteriores montajes experimentales en estas células. Para futuros ensayos se recomienda usar una concentración de 1500ng de ADNc para ACTB-1, ACTB-2, GAPDH-1 y 1000 ng de ADNc RNA18s-1 para obtener resultados confiables y verificables.