Thermolysin in human cultured keratinocyte isolation

Abstract

BACKGROUND: When treating extensively burned patients using cultured epidermal sheets, the main problem is the time required for its production. Conventional keratinocyte isolation is usually done using Trypsin. We used a modification of the conventional isolation method in order to improve this process and increase the number of colonies from the isolated epidermal cell population. PURPOSE: To compare the action of trypsin and thermolysin in the keratinocyte isolation using newborn foreskin. METHODS: This method used thermolysin as it selectively digests the dermo-epidermal junction. After dermis separation, the epidermis was digested by trypsin in order to obtain a cell suspension. RESULTS: Compared to the conventional procedure, these experiments demonstrated that in the thermolysin group, the epidermis was easily detached from the dermis, there was no fibroblast contamination and there were a larger number of keratinocyte colonies which had a significant statistical difference. CONCLUSION: The number of colonies in the thermolysin group was significantly greater than in the trypsin group.

INTRODUÇÃO: No tratamento do paciente grande queimado, onde se usa lâminas de epiderme cultivadas, o principal problema é o tempo necessário para sua produção. O isolamento tradicional de queratinócitos utiliza normalmente tripsina. No presente estudo, foi utilizada uma modificação do método de isolamento tradicional, que poderia produzir uma maior pureza e um maior número de colônias formadas a partir da população de células epidérmicas isoladas. OBJETIVO: Comparar a ação da tripsina e da termolisina no isolamento de queratinócitos usando pele de prepúcio de récem-nascidos. MÉTODOS: Essa metodologia utilizou a termolisina, que realiza a separação seletiva entre a epiderme e a derme. Após essa separação, a epiderme foi submetida à ação da tripsina para a obtenção da suspensão celular. RESULTADOS: Comparado ao método convencional, os experimentos mostraram que no grupo da termolisina mostrou facilidade para a separação entre a epiderme e derme, não houve contaminação por fibroblastos e produziu um maior número de colônias formadas, com diferença estatística significante. CONCLUSÃO: O número de colônias no grupo termolisina foi significantemente maior que no grupo tripsina.