Desenvolvimento e Validação de Um Método Imunofluorométrico Para a Pesquisa de Anticorpos Antiperoxidase Tiroidiana no Soro

Abstract

We developed an assay in which highly purified human TPO is adsorbed to microtiter plate wells; after incubation with the study serum samples, presence of specific antibodies is revealed by a monoclonal europium-labeled antibody against human IgG. The sensitivity of the test is 0.6U/mL, and the reproducibility quite acceptable. We analyzed serum samples from: 188 normal subjects of both sexes, 74 of whom >65 years of age; 54 patients with Graves' disease (GD) and 13 with Hashimoto thyroiditis (HT). Based on 97 routine samples, the method was compared to a commercial RIA, and a high concordance was found, with a kappa index of 0.959. The definition of a cut-off value for the presence of anti-TPO antibodies was based on a ROC curve and was set at 10U/mL. Positive anti-TPO values were found in 9.6% of the normal subjects up to 64 years of age, and in 16.5% of those >65 years. Patients with GD presented 85.2% of positivity, and those with HT showed 100% positivity. Thus, we described a sensitive and specific easy to perform assay, for detection of autoantibodies against thyroid peroxidase in patients with thyroid autoimmune diseases.

Desenvolvemos um ensaio onde TPO altamente purificada, obtida a partir de tecido humano, é adsorvida em poços de placas de microtitulação; após incubação com os soros a serem estudados, a revelação da presença de anticorpos específicos é feita com o emprego de anticorpo monoclonal anti-IgG humana marcado com európio. A sensibilidade do teste é da ordem de 0,6U/mL, e as características de reprodutibilidade bastante aceitáveis. Foram analisadas amostras de soro de 188 indivíduos normais de ambos os sexos (74 com >65 anos), de 54 pacientes com doença de Graves (DG) e de 13 com tiroidite de Hashimoto (TH). O método foi comparado, com base em 97 amostras, com um RIE comercial, encontrando-se alta concordância com índice kappa de 0,959. O estudo do valor de corte para definir a presença de anticorpos anti-TPO em níveis significativos baseou-se na curva ROC, e foi fixado em 10U/mL. A freqüência de anti-TPO positivo na população normal foi de 9,6% em indivíduos até 64 anos e de 16,5% nos com >65 anos; nos pacientes com DG 85,2% apresentaram anti-TPO positivo, sendo 100% nos pacientes com TH. O ensaio descrito mostrou-se sensível e específico e de fácil execução para a detecção de autoanticorpos contra a peroxidase tiroidiana presentes na maioria dos indivíduos com doença auto-imune tiroidiana.