Efeito da adição de colesterol sobre a viabilidade e fertilidade de espermatozóides equinos refrigerados

Abstract

A inseminação artificial com sêmen refrigerado é uma biotecnia imprescindível para os programas reprodutivos de equinos. Entretanto, durante a refrigeração o espermatozoide pode sofrer danos irreversíveis que irão prejudicar os índices de fertilidade. A incorporação de colesterol ligado a ciclodextrina (CLC) é uma estratégia de aumentar a resistência espermática em baixas temperaturas. No entanto, estudos anteriores tem sugerido que o colesterol presente em altos níveis na membrana plasmática pode interferir no processo de capacitação e consequentemente de fertilização. Para isso, foi realizado um trabalho dividido em cinco experimentos. No experimento 1 o objetivo foi determinar a concentração mais adequada de CLC para a utilização na refrigeração de espermatozoides equinos. No experimento 2 o objetivo foi comparar as temperaturas de 15º C e 5º C para refrigeração de espermatozoides equinos tratados com CLC. No experimento 3 o objetivo foi verificar a influência da adição de CLC sobre a qualidade do sêmen refrigerado de garanhões bad cooler e good cooler. No experimento 4 o objetivo foi avaliar a influência da adição de CLC sobre a ocorrência de reação acrossomal. O objetivo do experimento 5 foi avaliar a fertilidade de espermatozoides refrigerados de garanhões bad cooler (BC) e good cooler (GC) tratados com CLC. No experimento 1 foram utilizados dois ejaculados de 24 garanhões. Após a diluição com Botu-Sêmen® na concentração de 50 x 106 espermatozoides/mL, cada ejaculado foi dividido em quatro grupos: controle (C) e tratado com 1 mg (CLC-1), 1,5 mg (CLC-1,5) e 2 mg (CLC-2) de CLC/120 x 106 de espermatozoides e refrigerado por 48 horas a 5º C. Para o experimento 2 foram utilizados dois ejaculados de 12 garanhões. Cada ejaculado foi diluído conforme o experimento 1, dividido em quatro grupos: C e CLC-1,5 refrigerados a 15º C e a 5 º C por 24 horas. Para o experimento 3 foram utilizados...

Artificial insemination with cooled semen is an invaluable biotechnique for equine reproductive programs. However, the cooling process may cause irreversible damage to spermatozoa, thus reducing fertility rates. The incorporation of cholesterol-loaded cyclodextrin (CLC) to the plasmatic membrane is an strategy to increase sperm resistance to low temperatures. However, previous studies have suggested that high levels of cholesterol may interfere with capacitation process and, consequently, with fertilization. To this end, a study was performed in five experiments. In experiment 1, the aim was to determine the best CLC concentration for the purpose of cooling equine spermatozoa. In experiment 2, the aim was to compare the temperatures of 15 ºC and 5 ºC for cooling equine semen treated with CLC. In experiment 3, the aim was to assess the influence of CLC addition for cooled semen quality of bad cooler (BC) and good cooler (GC) stallions. In experiment 4, the aim was to evaluate the influence of CLC addition for the occurrence of acrosome reaction. The aim of experiment 5 was to evaluate the fertility of cooled CCL-treated semen from BC and GC stallions. In experiment 1, two ejaculates from 24 stallions were used. After dilution with Botu-Sêmen® to a concentration of 50 x 106 cells/mL, each ejaculate was divided into four groups: control (C) and treated with 1 mg (CLC-1), 1.5 mg (CLC-1.5) and 2 mg (CLC-2) and 2 mg (CLC-2) of CLC/120 x 106 cells, and cooled for 48 hours at 5 ºC. For experiment 2, two ejaculates from 12 stallions were used. Each ejaculated, after dilution according to experiment 1, was divided into 4 groups: C and CLC-1.5 cooled at 15 ºC and 5 ºC for 24 hours. For experiment 3, two ejaculates from nine GC and nine BC stallions were used. The ejaculates were diluted according to the previous experiments and divided into two groups: C and CLC-1.5 cooled at 5 ºC for 48 hours. In experiments 1, 2 and 3, sperm ...