Estudos in vitro e in vivo da atividade biológica de fluorquinolonas, tiossemicarbazonas, diamidinas aromáticas e aromáticas e as sobre Trypanosoma cruzi

Abstract

No centenario da descoberta da doenca de Chagas (DC), esta parasitose negligenciada causada pelo Trypanosoma cruzi e importante causa de mortalidade e morbidade na America Latina, sem vacinas ou agentes quimioterapicos satisfatorios. Esta tese objetivou analisar atividade, seletividade e mecanismos de acao sobre o T.cruzi de 04 classes de compostos (fluorquinolonas - FQ, tiossemicarbazonas - TS, diamidinas aromaticas - DA e arilimidamidas – AIA – uma nova classe a partir de DA) in vitro e in vivo. FQ como NOR e SPAR sao antibioticos com ampla acao bactericida, atuando sobre o DNA via toposoimerases. Embora SPAR e NOR nao tenham sido ativas, seus complexos metalicos de cobre-fenantrolina foram efetivos sobre tripomastigotas e formas intracelulares de T.cruzi, (IC50 1,62 a 4,65µM). TS sao agentes anti-tumorais e microbicidas que atuam sobre ribonucleotideo redutases e cisteina proteases. Todas TS apresentaram baixa toxicidade (>200µM) sobre celulas de mamiferos. Embora N4-metil-4-nitrobenzaldeido-tiossemicarbazona, N4-metill-4-nitroacetofenona-tiossemicarbazona e seus complexos metalicos de manganes (Mn) não tenham sido ativos, o complexo de Mn da N4-metil-4-nitrobenzofenona-tiossemicarbazona revelou-se moderadamente ativo sobre formas sanguineas (IC50 19µM). A terceira classe foi DA, ligantes de DNA com excelente atividade sobre diversos patogenos. Embora todas tenham baixa toxicidade sobre cardiomiocitos, somente tres (DB1645, DB1582 e DB1651) foram ativas contra formas sanguineas e intracelulares (IC50 entre 0,15 a 13,3µM), com atividade relacionada a curvatura das moleculas (sendo as moleculas lineares as nao efetivas). Todas DA localizam-se no nucleo e kDNA dos parasitos, com maior acumulo na ulti Analise in vitro da AIA DB766 sobre T.cruzi revelou: (i) excelente atividade sobre formas sanguineas (60nM) e intracelulares (25nM), mantendo otima acao mesmo quando o parasito e incubado com 96% de sangue de camundongo, sugerindo assim, um potencial uso profilatico, (ii) ação sobre diferentes cepas (peridomiciliares/silvestres), incluindo as naturalmente resistentes ao benznidazole (BZ), com superior eficacia que BZ, (iii) localizacao em compartimentos ricos em DNA, induzindo danos ultra-estruturais na mitocondria. Com base no excelente indice de seletividade (>533 e 714), ensaios foram conduzidos durante a infeccao aguda experimental por T.cruzi (cepas Y e Colombiana), em doses diarias ou alternadas =100mg/kg/dia da DB766 sozinha ou associada ao BZ, administradas via ip ou p.o. por ate 20 dias, com primeira dose no inicio da parasitemia. DB766 (25 e 50mg/kg/dia ip e 100mg/kg/dia p.o.) reduziu (>90%) a carga parasitaria (sangue e tecido cardiaco) e protegeu 90-100% contra mortalidade, com semelhante eficacia ao BZ. AIA reverteu inflamacao e alteracoes eletricas cardiacas e protegeu contra lesoes hepaticas e musculares induzidas pela infeccao. Doses sub-otimas de BZ associado com a DB289 (DA - pro-droga da DB75 – via p.o.) ou com a DB766 (ip) resultaram em =99% reducao de parasitemia e 100% de protecao sobre mortalidade. BZ (p.o)+DB766 (ip) resultou em cura parasitologica (2 em 15 animais) avaliada por hemocultivo e PCR. AIA foi a mais ativa e seletiva sobre T. cruzi, estimulando a continuidade de ensaios pre-clinicos com representantes desta classe visando identificacao de novos farmacos para a DC