Las especies de micobacterias no tuberculosas o atípicas están presentes en muestras ambientales (agua, suelo, materia orgánica, lodo, entre otras). Estos microorganismos afectan principalmente a pacientes inmunosuprimidos, en el caso de los inmunocompetentes, se ven infectados por la inoculación directa (ej., traumatismos). Los estudios realizados para la recuperación de las micobacterias de muestras ambientales es muy limitada por la falta de métodos apropiados y la presencia de una gran cantidad de bacterias y hongos contaminantes que dificultan su aislamiento. El cloruro de cetilpiridinium (CPC) es uno de los descontaminantes utilizado con mayor frecuencia para la recuperación de Mycobacterium de muestras ambientales. En tal sentido, en esta investigación, se estableció el efecto del CPC y su utilidad como agente descontaminante para el aislamiento de especies de Mycobacterium phlei de muestras de suelo. La muestra utilizada se recolectó de forma no aleatoria, se le inoculó una población conocida de M. phlei y se procesó empleando diferentes concentraciones de CPC 0,65%, 0,75%, 0,85%; temperaturas (temperatura ambiente y 37ºC) y tiempos de exposición al agente descontaminante (2, 4, 6, 8, 12, 24 horas). Los resultados indican que el CPC al 0,75% durante 2 horas de exposición inhibe de forma representativa el crecimiento de la población de M. phlei (1,7%), mientras que la microbiota del suelo disminuyó en menor proporción (4,4%) en las mismas condiciones. Por tal razón, el efecto del CPC sobre M. phlei fue mayor que sobre la flora habitual del suelo; esto puede deberse a que la sensibilidad al agente descontaminante varía entre las distintas especies de Mycobacterium.10-15egarcia@ula.ve, egamor@cantv.netsemestralDiverse species of nontuberculous mycobacteria are present in environmental samples (water, soil, organic matter, mud, among others). These microorganisms mainly affect immunocompromised patients, and in the case of the non-immunocompromised, these are infected by direct inoculation (eg. injuries). Studies aimed at recovering mycobacteria from environmental samples are limited by the lack of appropriate methods and the presence of a large number of bacterial and fungal contaminants that hinder their isolation. The cetilpiridinium chloride (CPC) is one of the most decontaminant agents used for the recovery of Mycobacterium from environmental samples. In this research, we set up the effect of the CPC and its use as decontaminant agent for the isolation of Mycobacterium phlei species from soil samples. To do this, a soil sample, was non-randomly collected and inoculated with a known population of M. phlei and processed using different CPC concentrations: 0.65%, 0.75%, 0.85%; incubates at room temperature and at 37 ºC, and expose to the decontaminant agent for 2, 4, 6, 8, 12, 24 hours. Our results suggest that a CPC concentration of 0.75% and 2 hours of exposure, significantly inhibit the growth of M. phlei (1.7%), whereas the remaining soil microbiota, diminished in smaller proportion (4.4%) in the same conditions. In conclusion, the effect of the CPC was greater on M. phlei population than on the habitual soil microbiota and this can be due to the fact that the sensitivity to the decontaminant agent differs between several Mycobacterium species.