Afim de biomonitorar os poluentes ambientais, nas últimas décadas foram aplicadas diversas metodologias em organismos modelos, utilizados como biomarcadores de efeitos genotóxicos, mutagênicos e/ou recombinogênicos. Foi objetivo deste estudo avaliar o potencial efeito da poluição atmosférica associada à urbanização, na genotoxicidade no organismo modelo Drosophila melanogaster, através do Ensaio Cometa. O local de estudo foi a cidade de Vitória de Santo Antão, em Pernambuco. A fim de investigar o possível efeito genotóxico da poluição atmosférica associada à urbanização, foram estudas larvas do inseto Drosophila melanogaster (Diptera, Drosophilidae) expostas por seis dias (do estágio embrião ao estágio larval) aos poluentes atmosféricos em uma área urbana e uma área rural do município. Os resultados foram comparados a um grupo controle negativo, exposto no mesmo período em uma área preservada, o Parque Nacional do Catimbau. Como metodologia de estudo foi aplicado o Ensaio Cometa com células de hemócitos obtidos de cerca de 60 larvas em terceiro estágio, para cada uma das três réplicas analisadas, em cada tratamento (ambiente rural, urbano e parque nacional). Os danos genéticos dos três grupos de tratamento foram classificados em quatro categorias, de zero (sem dano) a quatro (altamente danificado) de acordo com os padrões dos cometas formados. Os resultados foram analisados através do teste estatístico Mann-Whitney que demonstrou significativos danos genéticos nos organismos submetidos ao ambiente urbano de Vitória de Santo Antão, em comparação aos organismos expostos ao ambiente rural e ao Parque Nacional do Catimbau. Os resultados abrem perspectivas para que mais estudos sejam realizados sobre a poluição ambiental em ambientes urbanos, através da metodologia do Ensaio Cometa com o organismo modelo D. melanogaster.