| dc.identifier | Freire Tabosa Viana, Isabelle; Dhalia, Rafael. Produção e validação de antígenos recombinantes dos vírus HIV-1/2 e HTLV-1/2 para o desenvolvimento de kits de diagnóstico através de microarranjos líquidos. 2011. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2011. | |
| dc.description | Os Vírus da Imunodeficiência Humana (HIV) e o Vírus Linfotrópico de Células T Humanas
(HTLV) são membros da família Retroviridae e agentes etiológicos da síndrome da
imunodeficiência adquirida (AIDS) e da leucemia de células T do adulto/paraparesia espástica
tropical, respectivamente. Estas infecções são importantes problemas de saúde pública, de
modo que a triagem de doadores de sangue e populações de risco, através de métodos de
diagnóstico altamente sensíveis e específicos, é considerada crucial. Os principais sistemas de
diagnóstico são ainda baseados na detecção de anticorpos contra as proteínas virais p24 e
envelope Env através da técnica Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay ELISA, a qual,
embora útil, é limitada pela necessidade de grandes volumes de amostra, mão-de-obra e
equipamentos especializados, elevado custo e tempo de processamento. A fim de superar
estes entraves, nós desenvolvemos um ensaio baseado em p24 e Env através da técnica de
microarranjos líquidos. Para tanto, sequências de aminoácidos codificantes das proteínas p24
e Env de HIV-1/2 e HTLV-1/2 de isolados da América do Sul foram selecionadas, em bancos
de dados públicos, e alinhadas para a geração das respectivas sequências consenso. Estas
foram submetidas à busca por homologia e, a partir dos melhores homólogos, dois tipos de
antígenos foram desenvolvidos: (1) contendo a sequência completa e (2) contendo as regiões
mais hidrofílicas de cada proteína. As sequências obtidas foram otimizadas para expressão
bacteriana e submetidas à síntese comercial. Em seguida, estas foram clonadas em vetores de
expressão procarióticos, os quais foram utilizados para transformar bactérias, visando à
produção dos respectivos antígenos de HIV e HTLV. Os antígenos foram expressos, à
exceção das proteínas completas do Env, e validados através de ensaios de microarranjos
líquidos, utilizando três painéis padrão: HIV-1/2 (135 amostras), HTLV-1/2 (81 amostras) e
negativo (347 amostras). Os antígenos completos p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram
considerados altamente sensíveis e específicos, e seu desempenho foi comparável ao
observado utilizando antígenos comerciais como controle. Dentre os antígenos hidrofílicos, os
melhores resultados foram obtidos a partir dos antígenos gp46 HTLV-1/2, os quais
permitiram a diferenciação do subtipo viral. As proteínas p24 de HIV-1/2 e HTLV-1/2 foram
ainda utilizadas para a produção de anticorpos policlonais através da imunização de coelhos, e
os anticorpos obtidos serão ainda avaliados quanto à capacidade de capturar o antígeno p24
humano em casos de infecções iniciais. Os resultados obtidos neste projeto foram
considerados extremamente promissores, permitindo o desenvolvimento de um teste
diagnóstico com maior precisão, além de redução do custo, tempo de realização e volume de
amostras | |
