| dc.identifier | Siebra Paes Barreto, Raquel; Cassandra Breitenbach Barroso Coelho, Luana. Purificação e Caracterização Parcial de uma Lectina da entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth. 2007. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Bioquímica, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2007. | |
| dc.description | As lectinas são proteínas ou glicoproteínas que se ligam reversivelmente a carboidratos
com diferentes graus de seletividade, são encontradas em uma variedade de organismos e
estão envolvidas em numerosos processos celulares. Neste trabalho foi avaliada a
presença de lectina na entrecasca da Caesalpinia ferrea var. leiostachya Benth (CfeBL),
planta com ampla distribuição no Brasil e conhecida vulgarmente como pau-ferro. Extrato
bruto da entrecasca da C. ferrea foi obtido em NaCl 0,15 M. Este extrato foi submetido a
fracionamento com sulfato de amônio (F 0-80%, F80) e ensaios de atividade
hemaglutinante (AH) com diferentes tipos de eritrócitos. A fração F80 foi cromatografada
em uma coluna de quitina que foi eluida, respectivamente, com NaCl 0,15M e ácido
acético 1 M; CfeBL foi eluída com ácido acético 1M. A AH da CfeBL foi, então, avaliada
em presença de íons divalentes (Ca++ , Mg++), diferentes valores de pH (2- 12), por
carboidratos, glicoproteínas e ensaios da estabilidade térmica em diferentes temperaturas
(30 100 ºC, por 30 minutos). A massa molecular da proteína nativa foi determinada
usando uma coluna de Superdex 75-30 cm. Amostras da CfeBL foram submetiads a SDSPAGE
em condições desnaturantes e redutoras. Eletroforese bidimensional foi realizada
para a verificação do ponto isoelétrico (pI) e massa molecular. O grau de fluorescência da
CfeBL foi determinado através do espectrômetro de fluorescência. Eritrócitos de coelho
foram usados para avaliação da AH. A AH da CfeBL não sofreu alteração em presença de
íons nem em diferentes valores de pH. A CfeBL continuou ativa após aquecimento à 100
ºC, foi parcialmente inibida pelo carboidrato N-acetil-D-glicosamina e as glicoproteínas
fetuína, soro de coelho, azocaseína, caseína, ovoalbumina, soro fetal, tiroglobulina e
peroxidase não inibiram a AH da CfeBL. A CfeBL apresentou duas bandas por SDSPAGE
e o sistema Superdex 75-30 cm revelou dois picos protéicos com 19 e 15 KDa. Na
eletroforese 2D a massa molecular estimada foi de 20 e 15 KDa e o pI de 4,53 e 5,14. Não
foi observado crescimento de bactérias gram-positivas ou negativas em amostras de
CfeBL. Uma lectina, CfeBL, específica para N-acetil-D-glicosamina, estável em
diferentes temperaturas e variações de pH, foi obtida da entrecasca de C. ferrea por
cromatografia de afinidade em quitina, com potencial atividade antimicrobiana | |
