doctoralThesis
Purificação, imobilização e avaliação de propriedades biológicas da lectina da entrecasca de Crataeva tapia
Registro en:
Maria Sousa de Araújo, Regina; Tereza dos Santos Correia, Maria. Purificação, imobilização e avaliação de propriedades biológicas da lectina da entrecasca de Crataeva tapia. 2008. Tese (Doutorado). Programa de Pós-Graduação em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2008.
Autor
Maria Sousa de Araújo, Regina
Institución
Resumen
Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune cuja ligação
reversível e específica a carboidratos resulta em aglutinação celular. Estas proteínas,
presentes em bactérias, invertebrados, vertebrados e plantas são detectadas por ensaio de
hemaglutinação. Crataeva tapia L. pertence à família das Capparaceae. Uma lectina de
entrecasca de C. tapia, CrataBL, foi purificada à homogeneidade através de fracionamento
com sulfato de amônio (Fração 30-60%), seguida por cromatografia de troca iônica (CMCelulose).
CrataBL aglutinou eritrócitos de humanos, galinha e coelho (atividade
hemaglutinante específica, AHE, 102) e principalmente inibida por glicoproteínas. CrataBL
foi termoestável e tratamento com EDTA não afetou a atividade hemaglutinante (AH);
atividade não foi alterada após adição de Ca2+, Mn2+, Mg2+ e após tratamento com as
enzimas proteolíticas tripsina e quimiotripsina sua AH manteve-se estável. CrataBL migrou
como uma única banda após eletroforese para proteínas nativas básicas e duas bandas
polipeptídicas de massas moleculares 21.000 e 40.000 Da após SDS-PAGE com ou sem
agente redutor; os polipeptídeos foram também detectados usando reagente para
glicoproteína e sua porção carboidrato foi estimada em 12,8%. A natureza glicoprotéica de
CrataBL foi também revelada por sua interação com lectina glicose/manose em gel de
agarose. A massa molecular da lectina por cromatografia de filtração em gel foi de 40.000
Da. CrataBL imobilizada em Sepharose CL-4B adsorveu bioseletivamente caseína, fetuína,
ovoalbumina e isolou glicoproteínas de plasma sanguíneo humano. O efeito da lectina na
coagulação sanguínea foi avaliado através do tempo de tromboplastina parcial ativada
(TTPA), tempo de protrombina (TP) e tempo de trombina (TT). CrataBL apresentou
atividade anticoagulante somente na via intrínseca, onde o TTPA apresentou-se prolongado (dose-dependente) a partir de uma concentração de 1,25 μg da lectina. CrataBL apresentou
toxicidade para Artemia salina com LC50 de 71,7 μg/mL. A atividade antitumoral de
CrataBL (20 mg/kg) foi avaliada utilizando Sarcoma 180 implantado em camundongos
albinos Swiss (Mus muscullus) e foi detectada por redução do peso do tumor de 50,7%. A
atividade antiinflamatória de CrataBL foi avaliada pelo modelo de edema de pata induzido
por carragenina e a lectina apresentou efeito antiinflamatório significativo evidenciado pela
redução (35,4%) do número de neutrófilos no exsudato inflamatório. CrataBL também
apresentou atividade analgésica reduzindo em 34,8% o número de contorções induzidas por
ácido acético