masterThesis
Clonagem e sequenciamento de um fragmento de DNA específico de um isolado virulento de Paracoccidioides brasiliensis
Registro en:
Correia, Janaina; Antônio de Morais Júnior, Marcos. Clonagem e sequenciamento de um fragmento de DNA específico de um isolado virulento de Paracoccidioides brasiliensis. 2004. Dissertação (Mestrado). Programa de Pós-Graduação em Biologia de Fungos, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, 2004.
Autor
CORREIA, Janaina
Institución
Resumen
Paracoccidioides brasiliensis é um fungo dimórfico e agente etiológico da
paracoccidioidomicose, uma micose sistêmica de evolução aguda ou crônica que se
não diagnosticada e tratada a tempo pode ser fatal. Um método molecular para
caracterização e detecção de P. brasiliensis foi desenvolvido a partir da clonagem e
do sequenciamento de um fragmento de DNA de ~750 pb, obtido por RAPD
(Random Amplified Polymorphic DNA), presente em isolados virulentos e ausente
em isolados avirulentos deste fungo. Uma região interna do fragmento de DNA
seqüenciado foi usada para desenhar primers que posteriormente foram utilizados
em uma reação de hemi-nested PCR em tubo único. A reação de PCR específica foi
capaz de amplificar DNA de três isolados de P. brasiliensis reconhecidamente
virulentos e três isolados recentemente obtidos de pacientes com
paracoccidioidomicose. A especificidade desta PCR foi confirmada pela ausência de
produtos amplificados com DNA genômico de isolados de Histoplasma capsulatum,
Blastomyces dermatitidis, Coccidioides immitis, Sporothrix schenckii, Cryptococcus
neoformans, Candida albicans, Aspergillus fumigatus, Mycobacterium tuberculosis,
Leishmania braziliensis, Trypanosoma cruzi, Schistosoma mansoni, DNA genômico
humano (leucócitos) e de isolados de P. brasiliensis reconhecidamente avirulentas.
A amplificação de cDNA de um isolado virulento sugere tratar-se de um gene
expresso. A detecção específica de isolados virulentos de P. brasiliensis sugere ser
este um candidato a marcador de virulência para este fungo. O potencial diagnóstico
da PCR específica foi verificado com DNA extraído de aspirado de linfonodo de um
paciente com paracoccidioidomicose