La presente investigación se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos de la Facultad de Agronomía de la Universidad de San Carlos de Guatemala se evaluaron cuatro medios de cultivo para la germinación de semillas y dos medios para el crecimiento inicial de la orquídea L. lasioglossa. Los medios de cultivo evaluados para la germinación de semillas fueron: medio de cultivo Murashige y Skoog, medio de cultivo Kudson “C” Modificado, medio de cultivo Archila y medio Morel 1965. Los medios de cultivo Archila y Knudosn “C” modificado mostraron los mejores resultados en porcentaje de germinación con 61.05 % y 58.9 % respectivamente, estadísticamente no existió diferencia entre ellos. Los medios de cultivo MS y Morel 1965 mostraron un menor porcentaje de germinación siendo 24.7 % y 18.18 % respectivamente. En el crecimiento inicial de plantas de L. lasioglossa el medio de cultivo en el cual se observó la mayor altura fue el medio Archila con 5.7 mm, le siguió el medio de cultivo Knudson “C” modificado, en el cual se observó una altura de 4.2 mm en las plantas. Al realizar análisis combinado de medios para la germinación de semillas y medios de cultivo para el crecimiento inicial, estadísticamente el medio de cultivo Archila fue más efectivo. Cuando se germinan semillas en el medio Archila y se trasladan las semillas germinadas al mismo medio se produce mayor crecimiento, en comparación con el medio de cultivo Knudson “C” Modificado. Se recomienda el uso del medio de cultivo Archila, el cual además es simple y existe mayor facilidad de adquirir los componentes para su elaboración. La investigación realizada es una contribución para la conservación de la variabilidad genética de la biodiversidad de Guatemala, debido a que se han evaluado y obtenido resultados que incrementan la eficiencia para la propagación in vitro de L. lasioglossa.