Orientadores: Fabíola Taufic Mónica Iglesias, Gilberto de NucciDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Introdução: O mirabegron, é um agonista beta3-adrenérgico e foi aprovado em 2012 pelas agências regulatórias da comunidade européia, americana, canadense, japonesa para o tratamento da bexiga hiperativa. Em 2015, seu uso foi aprovado no Brasil. A ativação deste receptor pelas catecolaminas aumenta os níveis intracelulares do segundo mensageiro adenosina monofosfato cíclico (AMPc). Estudos em cardiomiócitos e na musculatura lisa vascular mostraram que a ativação destes receptores também pode levar ao aumento dos níveis de óxido nítrico (NO)-GMPc pela ativação da via fosfoisonitidina 3-quinase (PI3K)-proteina quinase B (PKB). Uma vez que i) o mirabegron é considerado um medicamento seletivo para o subtipo beta3 frente aos subtipos beta1 e beta2; ii) estudos clínicos envolvendo pacientes com bexiga hiperativa mostraram que a eficácia do mirabegron não foi inferior frente à terapia padrão e com pouca incidência de efeitos adversos e iii) substâncias que aumentam os níveis intracelulares de AMPc inibem as plaquetas, aventamos a hipótese de que o mirabegron poderia inibir a atividade plaquetária. Sendo assim, o objetivo deste estudo foi o de caracterizar farmacologicamente o efeito do mirabegron em plaqueta isolada de voluntários sadios. Material e Métodos: Realizamos estudos de agregação plaquetária com os agonistas colágeno e trombina na ausência e na presença de antagonistas mais seletivos para os receptores beta1, beta2 e beta3, dos inibidores da adenilato ciclase, da sintase de óxido nítrico (NOS) e da guanilato ciclase solúvel (GCs). Posteriormente, os níveis dos nucleotídeos cíclicos AMPc, guanosina monofosfato cíclico (GMPc) e do tromboxano B2 (TXB2) foram determinados. Ensaios de fluorimetria utilizando o fluoróforo Fura 2AM foi realizado para determinação da mobilização de cálcio (Ca2+) total e intracelular. Resultados: O mirabegron (10 ¿ 300 ?M) produziu inibição significativa na agregação induzida pelo colágeno ou trombina. Uma vez que a trombina é um potente agregante plaquetário, todos os próximos protocolos foram realizados com este agonista. Posteriormente, pré-incubamos as plaquetas com o antagonista seletivo beta3, L 748,337 (1 µM) e com o inibidor da adenilato ciclase solúvel, SQ 22,536 (100 µM) e pudemos observar uma reversão do efeito inibitório do mirabegron para os mesmos níveis do controle. O mirabegron aumentou os níveis intracelulares do AMPc e diminui a liberação de TXB2. Para confirmar que o efeito do mirabegron não era devido à ativação dos receptores beta1 ou beta-2, realizamos a agregação plaquetária na presença dos antagonistas atenolol e ICI 118,551. Entretando, o bloqueio dos receptores beta-1 e beta-2 não interfereiu na atividade inibitória induzida pelo mirabegron. Em plaquetas pré-incubadas com os inibidores da NOS (L-NAME, 100 µM) e da GCs (ODQ, 10 µM) observamos uma reversão parcial do efeito inibitório induzido pelo mirabegron, entretanto, os níveis intracelulares de GMPc não foram alterados. O mirabegron foi capaz de reduzir substancialmente os níveis totais e intracelulares de Ca2+. Conclusão: o mirabegron inibiu a agregação plaquetária por um mecanismo dependente da ativação dos receptores beta3-adrenérgicos levando à maiores e menores níveis intracelulares de AMPc e Ca2+, respectivamente. Nossos achados sugerem que agonistas beta3-adrenérgicos possam ser utilizados como adjuvantes da terapia antiplaquetáriaAbstract: Introduction: Mirabegron is a beta3-adrenergic receptor agonist and was approved in 2012 by the regulatory agencies of the European, American, Canadian, Japanese community for the treatment of hyperactive bladder. In 2015, it was approved in Brazil. The activation of this receptor by the catecholamines increases the intracellular levels of the second messenger adenosine monophosphate (cAMP). Studies in cardiomyocytes and the smooth vascular musculature showed that activation of these receptors can also lead to increased levels of nitric oxide (NO)-cyclic guanosine monophosphate (cGMP) by activating the phosphoinositide 3-kinase (PI3K)-protein kinase B (PKB). Because i) mirabegron is considered selective for beta3-AR relative to the beta1- and beta2-AR, ii) clinical trials showed that mirabegron in noninferior to the standart therapy for the treatment of overactive bladder and induce low incidence of adverse effects and iii) substances that increase the levels of cAMP reduce platelets activity, we tested the hypothesis that mirabegron could inhibit platelet activity. Therefore, the aim of this projetct is to characterize pharmacologically the effect of mirabegron in isolated platelets from healthy volunteers. Material and methods: We conducted platelet aggregation studies with collagen agonists and thrombin in the absence and presence of beta1-, beta2- and beta3-ARs antagonists, inhibitors of adenylate cyclase, nitric oxide synthase (NOS) and soluble guanylate cyclase (sGS). The levels of cAMP, cGMP and thromboxane B2 (TXB2) and the total and intracellular calcium (Ca2+) mobilization were also determined. Results: Our results showed that mirabegron (10-300 µM) produced significant inhibitions on platelet aggregation induced by collagen- or thrombin. Thrombin is considered one of the most potent aggregating agents, and hence all the next protocolos were carried out using this agonist. The ß3-antagonist L 748,337 (1 µM) and the adenylate cyclase inhibitor, SQ 22,536 (100 µM) reversed the inhibition induced by mirabegron in thrombin-stimulated platelets. The selective antagonists for ß1- and ß2-ARs, atenolol and ICI 118,551 (3 µM), respectively did not interfere on the inhibition induced by mirabegron. In Fluo-4 loaded platelets, mirabegron reduced the total and intracellular Ca2+ levels. Pre-incubation with mirabegron almost abolished the levels of TXB2 and increased the levels of cAMP. Platelets were pre-incubated with L-NAME or PDQ and a partial reversion of the inhibition induced by miranegron was observed; however; mirabegron was not able to increase the intracellular levels of cGMP. Conclusion: mirabegron inhibited human platelet aggregation leading to greater and lower intracellular levels of cAMP and Ca2+, respectively. Our findings suggested that substances that activate ß3-AR could be used as adjuvant antiplatelet therapyMestradoFarmacologiaMestre em Farmacologia131907/2105-8CNPQ