Orientador: Edi Lúcia SartoratoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A perda auditiva é a deficiência sensorial mais frequente em humanos, afetando cerca de um em cada 500 recém-nascidos. Dentre as causas da perda auditiva, mais de 60% dos casos de perda auditiva congênita são genéticos. Acredita-se que no Brasil a surdez com origem genética pode chegar a 16% dos casos sendo que em 70% deles a surdez é não-sindrômica. Em 80% das perdas auditivas não-sindrômicas a herança é autossômica recessiva, em 10 a 20% autossômica dominante, em 2 a 3% ligada ao cromossomo X e em 1% é de herança materna. Mutações no DNA mitocondrial (mtDNA) têm sido associadas à surdez induzida por aminoglicosídeos e a surdez não-sindrômicas em diferentes populações. Ao todo, 52 mutações distribuídas em 15 genes mitocondriais, responsáveis pela síntese de tRNA ou rRNA, estão envolvidos com a perda auditiva. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo a padronização de um método molecular, no qual um grande número de indivíduos pôde ser analisado de forma simultânea, com o rastreamento de 50 alterações esclarecendo a etiologia em alguns casos, além de servir de grande valia para as políticas públicas na área dos estudos da surdez. Utilizando tecnologia high-throughput de genotipagem de espectrometria de massa Iplex Gold/Maldi TOF MS, foram estudadas 50 alterações. Ao todo 256 indivíduos foram analisados, sendo 152 pacientes com perda auditiva neurossensorial e 104 controles ouvintes. A técnica foi posteriormente validada através de análise por sequenciamento pelo método de Sanger. Foram detectadas 15 alterações mitocondriais conhecidas (G709A, A735G, A827G, G988A, A1555G, T4363C, T5628C, T5655C, G5821A, C7462T, G8363A, T10454C, G12236A, T1291C, G15927A). Este estudo contribuiu para mostrar o espectro de variantes mitocondriais em pacientes brasileiros com perda auditiva, além de reforçar a extrema importância do estudo do gene MT-RNR1, que apresentou 80% das alterações encontradas. A frequência da A1555G foi relativamente alta (2,6%), indicando que essa mutação é uma importante causa de perda auditiva em nossa população. Este trabalho relata pela primeira vez a investigação e a detecção da mutação G8363A em pacientes brasileiros com perda auditiva neurossensorial maternal. A técnica de genotipagem por espectrometria de massa se mostrou extremamente confiável com todos os seus resultados confirmados pelo sequenciamento direto. Tais resultados comprovam que essa tecnologia é uma ótima ferramenta a ser empregada nos testes de diagnóstico molecular da perda auditiva, pois apresenta um baixo custo e alta acuráciaAbstract: Hearing loss is the most common sensory deficit in humans, affecting about one in five hundred newborns. Among the causes of hearing loss, more than 60% of cases of congenital hearing loss are genetic. It is believed that in Brazil deafness with genetic origin can reach 16% of the cases and in 70% of them the deafness is non-syndromic. In 80% of the non-syndromic hearing losses the inheritance is autosomal recessive, in 10 to 20% autosomal dominant, in 2 to 3% linked to the X chromosome and in 1% it is of maternal inheritance. Mutations in mitochondrial DNA (mtDNA) have been associated with aminoglycoside-induced and non-syndromic deafness in different populations. Altogether, 52 mutations distributed in 15 mitochondrial genes, responsible for the synthesis of tRNA or rRNA, are involved in hearing loss. Thus, the present study aimed to standardize a new molecular method, in which a large number of individuals could be analyzed simultaneously, with the tracking of a vast amount of alterations clarifying the etiology in some cases, besides serving of great value for public policies in the area of studies of deafness. Using high-throughput genotyping of Iplex Gold / Maldi TOF MS mass spectrometry, 50 changes were studied. A total of 256 individuals were analyzed, of which 152 patients had sensorineural hearing loss and 104 hearing controls. The technique was later validated by direct sequencing analysis. Fifteen known mitochondrial alterations were detected (G709A, A727G, G988A, A1555G, T4363C, T5628C, T5655C, G5821A, C7462T, G8363A, T10454C, G12236A, T1291C, G15927A). This study contributed to show the spectrum of mitochondrial variants in Brazilian patients with hearing loss, besides reinforcing the extremely important study of the MT-RNR1 gene, which presented 80% of the alterations found. The frequency of A1555G was relatively high (2.6%), indicating that this mutation is an important cause of hearing loss in our population. This paper reports for the first time the investigation and detection of the G8363A mutation in Brazilian patients with maternal sensorineural hearing loss. The mass spectrometry genotyping technique proved to be extremely reliable with all its results confirmed by direct sequencing. These results prove that this technology is a great tool to be used in molecular diagnostic tests of hearing loss, because it presents a low cost and high accuracyMestradoCiencias BiomedicasMestre em Ciências MédicasCAPES