Orientador: Ricardo Della ColettaTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Os fibroblastos associados ao carcinoma (do inglês CAF - carcinoma-associated fibroblasts) demonstram um papel importante na tumorigênese do carcinoma espinocelular (CEC) oral, o tumor mais comum da cavidade oral. Estudos prévios demonstraram que moléculas secretadas por CAFs promovem proliferação e invasão das células do CEC oral, induzindo um fenótipo mais agressivo. O presente estudo comparou o secretoma de CAFs e de fibroblastos orais normais por meio de proteômica baseada em espectrometria de massas e análise de redes biológicas. A comparação dos secretomas revelou que proteínas superexpressas por CAFs estão envolvidas na organização e remodelação da matriz extracelular e no metabolismo do colágeno. Dentre as proteínas mais expressas estão FNDC1 (fibronectin type III domain containing 1), SERPINE1 (serpin peptidase inhibitor, clade E, member 1) e STC2 (stanniocalcin 2), as quais tiveram suas expressões elevadas validadas por PCR quantitativo e ELISA em um grupo independente de linhagens celulares de CAFs. A transdiferenciação de fibroblastos orais normais em CAFs induzida por TGF-?1 foi acompanhada por um significante aumento na expressão de FNDC1, SERPINE1 e STC2, confirmando a presença destas proteínas no secretoma dos CAFs. Colágeno tipo I, o principal componente do tecido conjuntivo, também foi associado com vários processos biológicos superexpressos em CAFs. A análise imuno-histoquímica de PINP, o pró-peptídeo N-terminal do colágeno tipo I, revelou que a expressão de PINP é significantemente correlacionada com a presença de CAFs no fronte tumoral e com uma taxa de sobrevida significantemente menor em pacientes com CEC oral. A presença de CAFs no estroma tumoral também foi um fator prognóstico independente para a sobrevida livre de doença para os pacientes com CEC oral. Este estudo demonstra o valor do secretoma de CAFs para o microambiente de CECs orais e identifica novos potenciais alvos terapêuticos como FNDC1, SERPINE1 e STC2. Em adição, os resultados revelam que a expressão de colágeno tipo I por CAFs, representada pelos níveis de PINP, pode ser um marcador prognóstico para o CEC oral. , STC2Abstract: An important role in the tumorigenesis of oral squamous cell carcinoma (OSCC), the most common tumor of the oral cavity, is actually attributed to cancer-associated fibroblasts (CAF). Previous studies demonstrated that CAF-secreted molecules promote proliferation and invasion of OSCC cells, inducing a more aggressive phenotype. In this study, we searched for differences in the secretome of CAFs and normal oral fibroblasts (NOF) using mass spectrometry-based proteomics and biological network analysis. Comparison of the secretome profiles revealed up-regulated proteins involved mainly in extracellular matrix organization and disassembly and collagen metabolism. Among the up-regulated proteins were fibronectin type III domain containing 1 (FNDC1), serpin peptidase inhibitor type 1 (SERPINE1) and stanniocalcin 2 (STC2), which had their up-regulated expressions validated by quantitative PCR and ELISA in an independent set of CAF cell lines. TGF-?1-mediating NOFs transition into CAFs was accompanied by significant up-regulation of FNDC1, SERPINE1 and STC2, confirming the participation of those proteins in the CAF-derived secretome. Type I collagen, the main constituent of the connective tissue, was also associated with several up-regulated biological processes. The immunoexpression of PINP, the type I collagen N-terminal propeptide, was significantly correlated in vivo with CAFs in the tumor front, and was associated with significantly shortened survival of OSCC patients. Presence of CAFs in the tumor stroma was also an independent prognostic factor for OSCC disease-free survival. These results demonstrate the value of secretome profiling to evaluate the role of CAFs in the tumor microenvironment and identify potential novel therapeutic targets such as FNDC1, SERPINE1 and STC2. Furthermore, type I collagen expression by CAFs, represented by PINP levels, may be a prognostic marker of OSCC outcomeDoutoradoPatologiaDoutora em Estomatopatologia141747/2013-7, 473825/2013-9570/2013CNPQCAPES