Orientador: Carlos Henrique Inácio RamosDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de QuímicaResumo: Chaperonas moleculares pertencem à classe de proteínas com funções específicas no organismo, responsáveis por evitar agregação proteica e auxiliar o enovelamento de proteínas não enoveladas, ou seja, promovem, portanto, a homeostase proteica. A Hsp90 é uma chaperona bastante conhecida, dimérica e conservada; possui função com caráter auxiliador de enovelamento de proteínas parcial ou totalmente desenoveladas. Para auxiliar as chaperonas e tornar seu funcionamento completo, muitas delas interagem com co-chaperonas, também com papel fundamental no enovelamento proteico e na prevenção da agregação. A co-chaperona SGT1 apresenta estas funções ao cooperar com a HSP90, sendo expressa em diversos organismos, como bactérias, fungos, vegetais e mamíferos, principalmenteem condições de estresse térmico, auxiliando na proteção de proteínas contra agregação. Apresentamos, pela primeira vez, a clonagem, expressão e caracterização da SGT1 de cana-de-açúcar, um vegetal de extrema importância econômica para o Brasil. O gene da SGT1 foi clonado em pET28a e a proteína expressa em Escherichia coli (BL21DE3). A proteína recombinante foi purificada por duas etapas cromatográficas (cromatografia de afinidade e exclusão por tamanho) com rendimento médio de 20 mg por litro de indução. A análise de dicroísmo circular e espectroscopia de fluorescência mostraram que a proteína foi purificada enovelada e que sua estrutura secundária foi predominantemente do tipo hélice-'alfa' (42 ± 5%). A Temperatura na média da transição obtida para o desenovelamento térmico foi de 55°C, dados que concordam com o DSC e DSF, e a concentração média de uréia na média da transição para o desenovelamento químico foi de 3,3 M. A caracterização hidrodinâmica determinou massa molecular igual a 40 ± 3 kDa, raio de Stokes igual a 37,1 ± 2,2 e coeficiente de difusão igual a 3,6 ± 0,2 x 10-7 cm/s, indicando que a proteína foi purificado enovelada como um monômero e que provavelmente apresenta conformação alongadaAbstract: Molecular chaperones belong to a diverse class of proteins with specific functions in the organism. They are responsible for promote the proteostasis by assisting the folding process of a wide range of proteins and preventing aggregation of misfolded proteins. The Hsp90 is one of the most important and well-known family of chaperones, normally dimeric and conserved that assist the folding of partially or totally unfolded proteins. To assist chaperones and improve their functioning, many of them interact with co-chaperones. In this context, the co-chaperone SGT1 is present in many organisms such as bacteria, fungi, plants and mammals and cooperate with Hsp90 to function. SGT1 is particularly expressed in conditions of thermal stress, aiding in protection against unfolding protein. This work aims to clone, express and characterize SGT1 from sugarcane (SsSGT1), a plant of great economic importance to Brazil. First, the SGT1 gene was cloned into pET28a and the protein was expressed in Escherichia coli (BL21DE3). The recombinant protein was purified by two chromatographic steps (affinity and size exclusion chromatography) with an average yield of 20 mg per liter of induction. The circular dichroism and fluorescence spectroscopy analysis showed that the purified protein was folded and the global composition of secondary structure was predominantly 'alpha'-helix (42 ± 5%). Using thermal unfolding by CD, we obtained the temperature in the middle of the transition (Tm) of 55 °C, which agrees with the data from DSC and DSF.Chemical unfolding measured by CD presented the concentration of urea in the middle of the transition (Cm) of 3.3 M. The hydrodynamic characterization determined molecular mass of 40 ± 3 kDa, Stokes radius of 37.1 ± 2.2 and diffusion coefficient of 3.6 ± 0.2 x 10-7 cm/s, indicating that the protein behaves as a monomer in solution and probably has elongated conformationMestradoQuimica OrganicaMestra em QuímicaCAPES