Orientadores: Carlos Eduardo Steiner, Cláudia Vianna Maurer MorelliTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: A gangliosidose GM1 é um distúrbio de armazenamento lisossômico autossômico recessivo raro com alta prevalência no Brasil (1:17 000). A diminuição da atividade da enzima ß-galactosidase leva à deposição de gangliosídeos GM1 dentro dos lisossomos. O presente estudo teve como objetivo inibir a atividade do gene glb1em zebrafishutilizando a técnica do morfolino. Foram utilizados testes de hibridização in situ X-gal e whole-mount para confirmar a atividade de ?-galactosidase em larvas com 72, 96 e 120 hpf que foram previamente micro-injectadas com oligos morfolinos e controle de desacoplamento. Os resultados foram comparados a grupos controles selvagem e mismatch. A formação óssea foi avaliada pelo azul de Alcian e testes de alizarina, além de análise comportamental feita pelo teste de toque evocado, sendo os resultados analisados por Kruskal-Wallis. Todos os experimentos mostraram ausência de ß-galactosidase no sistema nervoso central e um retorno gradual à expressão gênica normal após 96 hpf. A displasia óssea foi evidente a partir de 96 hpf, assim como a letargia aparente dos animais microinjetados com morfolino, que pode ter ocorrido devido a um comprometimento neurológico juntamente com as malformações fenotípicas avaliadas, compreendendo fronte protusa, extensão diferenciada do saco vitelínico e malformação de cauda. Estes resultados confirmam a funcionalidade do oligo e que o zebrafish pode representar um modelo animal viável para o estudo da gangliosidose GM1Abstract: GM1 gangliosidosis is a rare autosomal recessive lysosomal storage disorder with high prevalence in Brazil (1:17 000). The decreased enzymatic activity of ß-galactosidase leads to GM1 ganglioside deposition inside the lysosomes. The present study aimed to knockdown the glb1 gene activity in zebrafish using the morpholino technique. X-gal and Whole-mount in situ hybridization tests were used to confirm ß-galactosidase activity at 72, 96 and 120 hpf larvae that were microinjected with morpholinos oligos, compared to mismatch and wild type control. The bone formation was evaluated by Alcian blue and alizarin tests, and behavioral analysis was performed by the touch-evoked test. Resultswere analyzed by Kruskal-Wallis. All experiments showed absence of ß-galactosidase in the central nervous system and a gradual return to normal gene expression after 96 hpf. Bone dysplasia was evident from 96 hpf, as well as the apparent lethargy of the animals microinjected with morpholino, which may have happened due to a neurological impairment together with the evaluated phenotypic malformations, which included frontal bossing, abnormal yolk extension, and tail malformation. These results confirm the functionality of the oligo and that zebrafish may represent a viable animal model for the study of GM1 gangliosidosisDoutoradoGenetica MedicaDoutora em Ciências2014/11891-6CNPQFAPESP