Regulação do fator de transcrição MEF2C pela quinase de adesão focal = implicações na homeostase dos cardiomiócitos = Regulation of transcription factor MEF2C by focal adhesion kinase: implications in the homeostasis of cardiomyocytes
Regulation of transcription factor MEF2C by focal adhesion kinase : implications in the homeostasis of cardiomyocytes
| dc.creator | Cardoso, Alisson Campos, 1983- | |
| dc.date | 2012 | |
| dc.date | 2017-04-03T19:44:23Z | |
| dc.date | 2017-07-20T12:30:51Z | |
| dc.date | 2017-04-03T19:44:23Z | |
| dc.date | 2017-07-20T12:30:51Z | |
| dc.date.accessioned | 2018-03-29T04:51:46Z | |
| dc.date.available | 2018-03-29T04:51:46Z | |
| dc.identifier | CARDOSO, Alisson Campos. Regulação do fator de transcrição MEF2C pela quinase de adesão focal: implicações na homeostase dos cardiomiócitos = Regulation of transcription factor MEF2C by focal adhesion kinase: implications in the homeostasis of cardiomyocytes. 2012. 224 p. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: <http://www.bibliotecadigital.unicamp.br/document/?code=000882160>. Acesso em: 3 abr. 2017. | |
| dc.identifier | http://repositorio.unicamp.br/jspui/handle/REPOSIP/311516 | |
| dc.identifier.uri | http://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/1351842 | |
| dc.description | Orientador: Orientador : Kleber Gomes Franchini | |
| dc.description | Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas | |
| dc.description | Resumo: Durante os primeiros dias do desenvolvimento pós-natal, os miócitos cardíacos perdem a capacidade de proliferação, sendo o crescimento adicional do coração decorrente de hipertrofia e não hiperplasia dos miócitos cardíacos. No entanto, em situações de estresse os miócitos cardíacos diferenciados podem apresentar desdiferenciação e reestabelecimento do ciclo celular. Os mecanismos envolvidos nesse fenômeno são ainda pouco compreendidos. No presente estudo, demonstramos que a ativação do fator de transcrição MEF2C (Myocyte Enhancer Factor 2-C) tem papel crítico no processo de desdiferenciação de miócitos cardíacos. Essa conclusão foi obtida por meio de experimentos de ganho de função pela superexpressão de MEF2C em miócitos ventriculares de ratos neonatos em cultura (MVRNs). Demonstramos que a superexpressão de MEF2C em MVRNs induziu a desdiferenciação e a ativação de mecanismos envolvidos na progressão do ciclo celular. Esses resultados foram obtidos por meio de experimentos de microarranjo de DNA, PCR em tempo real, western blotting e análise do fenótipo celular por microscopias de luz, confocal e eletrônica de transmissão. Esses fenômenos foram atenuados pela superexpressão da quinase de adesão focal (FAK), uma proteína que reconhecidamente exerce efeitos pró-hipertróficos em miócitos cardíacos adultos. Experimentos in vivo e in vitro demonstraram a interação direta entre o fator de transcrição MEF2C e a FAK. Estudos com base em ensaios de reação cruzada associada à espectrometria de massas, dinâmica molecular, espalhamento de raios-X a baixos ângulos e mutação sítio dirigida, demonstraram que as hélices 1 e 4 do domínio FAT da FAK interagem diretamente com a domínio de ligação ao DNA do dímero de MEF2C. Estudos de afinidade e de gel shift demonstraram que a porção FAT da FAK desloca a interação MEF2C/DNA in vitro. Ensaios de gene repórter demonstraram que a FAK, mediada pela região C-terminal, diminui a atividade transcricional de MEF2C em células C2C12. O conjunto de dados demonstra que a ativação do fator de transcrição MEF2C em MVRNs induz a desdiferenciação e ativação de mecanismos de progressão do ciclo celular e que a FAK impede esses efeitos através da interação inibitória no domínio de ligação de MEF2C ao DNA | |
| dc.description | Abstract: During the first days of postnatal development, cardiac myocytes lose their ability to proliferate, and the further growth of the heart is due to hypertrophy and not hyperplasia of cardiac myocytes. However, in response to stress, cardiac myocytes may have dedifferentiation and re-establishment of the cell cycle. The mechanisms involved in this phenomenon are still poorly understood. In the present study, we demonstrated that activation of the transcription factor MEF2C (myocyte enhancer factor 2-C) plays a critical role in the process of dedifferentiation of cardiac myocytes. This conclusion was obtained by gain-of-function experiments through overexpressing MEF2C in neonatal rat ventricular myocytes in culture (NRVMs). We also showed that overexpression of MEF2C in NRVMs induced the dedifferentiation and activation of mechanisms involved on cell cycle progression. These results were obtained by DNA microarray experiments, real time PCR, western blotting and cell phenotype analysis by light microscopy, confocal and electronic transmission. These effects were attenuated by overexpression of focal adhesion kinase (FAK) protein known to exert pro-hypertrophic effects on adult cardiac myocytes. In vivo and in vitro experiments demonstrated the direct interaction between the transcription factor MEF2C and FAK. A model based on crosslinking technology coupled with mass spectrometry, small angle X-ray scattering and the site directed mutation analyses indicated that alpha-helices 1 and 4 of FAK FAT domain interacts directly with the DNA binding domain of MEF2C dimer. Affinity studies and gel shift assay demonstrated that the FAK FAT domain displaces the MEF2C/DNA interaction in vitro. Reporter gene assays demonstrated that FAK, mediated by the C-terminal region, decreases the transcriptional activity of MEF2C in C2C12 cells. The data set shows that the activation of the transcription factor MEF2C in MVRNs induces dedifferentiation and activation of cell cycle progression and that FAK prevents these effects by inhibitory interaction with DNA binding domain of MEF2C | |
| dc.description | Doutorado | |
| dc.description | Biologia Estrutural, Celular, Molecular e do Desenvolvimento | |
| dc.description | Doutor em Ciências | |
| dc.format | 224 p. : il. | |
| dc.format | application/pdf | |
| dc.language | Multilíngua | |
| dc.publisher | [s.n.] | |
| dc.subject | Desdiferenciação celular | |
| dc.subject | Interação proteína-proteína | |
| dc.subject | Cell dedifferentiation | |
| dc.subject | Protein-protein interaction | |
| dc.subject | Cardiac myocyte | |
| dc.title | Regulação do fator de transcrição MEF2C pela quinase de adesão focal = implicações na homeostase dos cardiomiócitos = Regulation of transcription factor MEF2C by focal adhesion kinase: implications in the homeostasis of cardiomyocytes | |
| dc.title | Regulation of transcription factor MEF2C by focal adhesion kinase : implications in the homeostasis of cardiomyocytes | |
| dc.type | Tesis |