Tesis
Verificación de una cepa microbiana del sedimento de la Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo
Registro en:
Román Cáceres, Daniela Alejandra. (2016). Verificación de una cepa microbiana del sedimento de la Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo. Escuela Superior Politécnica de Chimborazo. Riobamba.
Autor
Román Cáceres, Daniela Alejandra
Resumen
En la presente investigación se realizó la verificación de la cepa microbiana de la Laguna
de San Antonio, Cantón Riobamba, Provincia de Chimborazo, determinándose mediante
pruebas de crecimiento en caldos nutritivos y agares específicos si la cepa microbiana
objeto de estudio (L3) correspondía a la bacteria Xenorhabdus nemathophilys, de
característica Gram-, que previamente fue estudiada en otra investigacion. Se evaluó la
presencia de UFC en cada medio utilizado, se realizó la secuenciación de la cepa
microbiana aplicando la reacción en cadena polimerasa (PCR), para finalmente establecer
la aplicabilidad del microorganismo definido en un proceso de Biorremediación. En la
fase experimental se eligieron cuatro muestras al azar de la cepa L3, mismas que fueron
activadas mediante la preparación de caldo nutritivo e incubadas a 35°C. Posteriormente
para la masificación de las muestras activadas se prepararon tres tipos diferentes de
medios de cultivo: Caldo nutritivo1, Caldo X, Caldo BHI, y para la siembra tres tipos de
agares: Agar nutritivo, Agar MacConkey, Agar Eosin. Mediante el método de dilución y
vertido en placa, se realizaron tres siembras de las cepas alimentadas en los diferentes
medios de cultivo. Tras la incubación se realizó el conteo bacteriano en las cajas que
presentaron mayor crecimiento y una vez finalizado, se realizó la purificación, ampliación
y secuenciación mediante la PCR de las cepas bacterianas en el laboratorio Macrogen en
Corea del Sur. Conociendo las características previas mediante revisión documentada de
Xenorhabdus nematophilys, y al observar el comportamiento de la bacteria en cada medio
utilizado, que no concordaba con lo que se conocía acerca de la misma, era imprescindible
recurrir al análisis de secuenciación genética en PCR para confirmar datos. Los resultados
determinaron la presencia de dos tipos de bacterias Gram+: Bacillus pumilus y Bacillus
altitudinis, distintas a la especie estudiada, lo que concluye que la identificación de
consorcios bacterianos puede ser validada únicamente por este tipo de procedimientos y
análisis. La aplicabilidad de los microorganismos encontrados mediante secuenciación
genética: Bacillus pumilus y Bacillus altitudinis son específicamente como control
biológico, fungicidas e insecticidas, los mismos que pueden ser aplicados en procesos de
biorremediación. The verification of the microbial strain of Laguna de San Antonio, Cantón Riobamba,
Chimborazo Province was carried out in this investigation, being determined by growth
tests in nutrient broths and specific agars if the microbial strain under study (L3)
corresponded to the bacterium Xenorhabdus nematophilys, of Gram- characteristic,
which was previously studied in other research. The presence of Colony- forming unit
(UFC) was evaluated in each means used; the sequencing of the microbial strain was
conducted using the polymerase chain reaction (PCR), to finally establish the
applicability of the microorganism defined in a bioremediation process. Four samples at
random were chosen in the pilot phase from the L3 strain, which were activated by
preparing nutrient broth and incubated at 35°C. Subsequently three different types of
culture media were prepared for the overcrowding of the activated samples: Nutrient
broth 1, Broth X, Broth BHI, and for sowing, three types of agars: Nutrient Agar,
MacConkey Agar, and Eosin Agar. Also three sowings of feeding strains were made in
the different culture media using the dilution and Pour plate method. The bacterial
counting was carried out after the incubation in the boxes which showed a greater growth,
and the purification, enlargement and sequencing were performed once completed the
process using the PCR of the bacterial strains at Macrogen laboratory in South Korea.
Knowing the previous features by documented review of Xenorhabdus nematophilys, and
observing the behavior of the bacterium in each medium, which was not cosistent with
what was known about it, it was imperative to resort to the analysis of genetic sequencing
in PCR to confirm data. The results showed the presence of two types of Gram+ bacteria:
Bacillus pumillus and Bacillus altitudinis, different from the species under study, which
concludes that the identification of bacterial consortiums can be validated only by this
type of procedures and analysis. The applicability of microorganisms found through
genetic sequencing: Bacillus pumillus and Bacillus altitudinis are specifically as
biological control, fungicides and insecticides, the same that can be applied in
bioremediation processe.