Dissertação
Identificação e quantificação de compostos fenólicos por CLAEDAD em polpa de frutas de cajá-umbu (Spondias spp.) e graviola (Annona muricata L.)
Identification and measurement of phenolic compounds by hplc-dad in pulp fruits cajá-umbu (Spondias spp.) and graviola (Annona muricata L.)
Registro en:
GUALBERTO, Nayjara Carvalho. Identificação e quantificação de compostos fenólicos por CLAEDAD em polpa de frutas de cajá-umbu (Spondias spp.) e graviola (Annona muricata L.). 2013. 121 f. Dissertação (Mestrado em Ciência e Tecnologia de Alimentos) - Universidade Federal de Sergipe, São Cristóvão, 2013.
Autor
Gualberto, Nayjara Carvalho
Institución
Resumen
The increased consumption of tropical fruits in the diet is due to the high nutritional
value, therapeutic effects and the presence of several compounds, including phenolic
acids and flavonoids. These compounds are considered the most common phenolic
antioxidants present in natural sources, as well as proven anti-inflammatory, antiallergic
action, antitumour activity, antihepatotóxica, antiulcer, antiviral, antiplatelet activity and
antimicrobial actions. In this context, the aim of this study was to identify and quantify
the phenolic compounds present in frozen pulp of cajá-umbu (Spondias spp.) and
soursop (Annona muricata L.) by HPLC-DAD, evaluating the antioxidant capacity of
these compounds against ABTS and DPPH. In addition to these analyses, further
physico-chemical characterization of pulps was carried out for pH, titratable acidity,
soluble solids, ash, lipid, protein and moisture contents. For the identification of
phenolic compounds by HPLC-DAD, two methods were proposed: Method 1 using the
the mobile phase of acetonitrile and 1% formic acid and Method 2 using water as the
mobile phase acidified with TFA and acetonitrile acidified with TFA. Solid phase
extraction with C18 cartridge was performed in both methods using elution with
different solvents or combinations such as acetone, methanol and ethyl acetate. We
performed a processing of the two analytical methods proposed in order to obtain a
satisfactory separation of the peaks in the samples. Only after injection and analysis of
13 analytical standards of phenolic acids and flavonoids in the two methods and refined
by performing calculations of chromatographic parameters (Rs, k, α), it was established
that the improvement in the method that was first obtained an adequate separation of
analytical standards, with a Rs> 1.5.This method was then validated according to the
guidelines established by INMETRO, following the parameters of selectivity, linearity
and concentration range, limit of detection and quantification, as well as testing
precision (repeatability) and recovery. In the fraction of acetone/methanol of soursop
pulp, larger amount of phenolic compounds analyzed by HPLC-DAD, including gallic
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acid, chlorogenic acid, catechin and a compound with a spectrum similar to ρ-coumaric
acid were identified. The fraction of acetone/ethyl acetate extracted more total phenolics
and flavonoids from the pulps of two fruits tested. In the analysis of antioxidant
capacity by ABTS method, the fractions extracted with acetone/methanol were more
efficient at capturing the radical in both the fruits. But in the analysis by DPPH method,
only soursop pulp showed the antioxidant activity. The results show that the soursop
pulp is more effective in capturing radicals due to its high content of bioactive
compounds than that of caja- umbu pulp. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES O aumento no consumo de frutas tropicais na dieta se deve ao elevado valor nutritivo,
aos efeitos terapêuticos e pela riqueza em diversos compostos, dentre eles os ácidos
fenólicos e flavonóides. Estes compostos são considerados os antioxidantes fenólicos
mais comuns presentes em fontes naturais, além de comprovada atividade
antiinflamatória, ação antialérgica, atividade antitumorigena, antihepatotóxica,
antiulcerogênica, antivirais, atuação antiplaquetária e ações antimicrobianas. Neste
contexto, o objetivo deste trabalho foi identificar e quantificar os compostos fenólicos
presentes na polpa congelada de cajá-umbu (Spondias spp.) e graviola (Annona
muricata L.) por CLAE-DAD, avaliando a capacidade antioxidante destes compostos
frente aos métodos ABTS e DPPH. Além destas análises, ainda foi realizada a
caracterização físico-química das polpas, com base nas caracterisiticas: pH, acidez
titulável, sólidos solúveis, cinzas, lipídeos, proteínas e umidade. Para a identificação dos
compostos fenólicos por CLAE-DAD foram propostos dois métodos. O método 1
utilizando nas condições analíticas como fase móvel acetonitrila e ácido fórmico 1% e o
método 2 utilizando como fase móvel água acidificada com TFA e acetonitrila
acidificada com TFA, em ambos foi realizada a extração em fase sólida com cartucho
C18, e diferentes solventes de eluição e diferentes combinação de ambos, entre eles a
acetona, metanol e acetato de etila. Foi realizado um aperfeiçoamento analítico dos dois
métodos propostos com a finalidade de obter uma separação satisfatória dos picos nas
amostras. Somente após a injeção e análise dos 13 padrões analíticos de ácidos
fenólicos e flavonóides nos dois métodos aperfeiçoados e através da realização dos
cálculos dos parâmetros cromatográficos (Rs, k e α), foi estabelecido que o
aperfeiçoamento no método 1 foi a que obteve uma separação adequada dos padrões
analíticos, com um Rs>1,5. Este método foi então validado segundo as recomendações
estabelecidas pelo INMETRO, seguindo os parâmetros de seletividade, linearidade e
faixa de concentração, limite de detecção e quantificação, assim como os ensaios de
iii
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precisão (repetitividade) e recuperação. A fração acetona/metanol da polpa de graviola
foi a que identificou maior quantidade de compostos fenólicos por CLAE-DAD, dentre
eles o ácido gálico, ácido clorogênico, catequina e um composto com espectro
semelhante ao ácido ρ-cumárico. A fração acetona/acetato de etila extraiu mais
compostos fenólicos totais e flavonóides totais para as polpas das duas frutas testadas.
Na análise da atividadede antioxidade pelo método ABTS as frações acetona/metanol
foram mais eficientes na captura do radical para as duas frutas. Porém para o método
DPPH somente a polpa da graviola apresentou atividade antioxidante. Contudo, os
resultados mostram ser a polpa da graviola mais eficaz na captura dos radicais, devido
ao elevado teor de compostos bioativos que a polpa do cajá-umbu. São Cristóvão
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