Tesis
Avaliação do Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primer (CODEHOP) e do painel para herpesvírus na detecção dos herpesvírus humano em amostras de plasma de pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas (TCPH)
Evaluation of Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Priner (CODEHOP) and herpesvirus panel to detection of human herpesviruses in plasma samples of patients transplanted hematopoietic stem cells (HSCT)
Registro en:
Autor
Dellariva, Talita Cristina, 1989-
Institución
Resumen
Orientadores: Sandra Helena Alves Bonon, Sandra Cecília Botelho Costa Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Introdução: Os Herpesvírus Humano são um importante grupo causador de infecções em pacientes imunocomprometidos e transplantados em geral. Especificamente em pacientes submetidos a transplante de células progenitoras hematopoéticas, os membros da família Herpesviridae têm sido associados com a ocorrência de altas taxas de morbidade e mortalidade. Atualmente, métodos moleculares de detecção e quantificação de agentes infecciosos têm sido amplamente implementados em rotina de laboratórios a fim de se minimizar os impactos e evitar manifestações clínicas causadas pelas herpesviroses. Objetivos: No presente estudo foram padronizadas e otimizadas as técnicas de COnsensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primer em formato Nested-PCR (NPCR CODEHOP), para a detecção das subfamílias de Herpesvírus Humano e, do Painel de Herpesvírus Humano em formato Nested-PCR Touchdown (NPCR-TD) na detecção do genoma das espécies de herpesvírus em amostras de plasma de pacientes transplantados de células progenitoras hematopoéticas e, posteriormente, ambas as técnicas foram avaliadas a partir da comparação com a técnica de NPCR, já estabelecida em laboratório, usada como referência padrão. Resultados: A partir da otimização da técnica de NPCR CODEHOP foi possível detectar as três subfamílias de herpesvírus em amostras controle positivo e nas amostras estudadas e, a comparação com a NPCR usada como referência padrão indicou que há concordância moderada entre as técnicas e acurácia acima de 80%. Através da NPCR-TD, todas as espécies puderam ser amplificadas pela técnica otimizada e, pela comparação com a técnica referência padrão, obteve-se concordâncias consideráveis e excelentes para as diferentes espécies, enquanto que a acurácia manteve-se acima de 90%. Pela comparação das medianas de positividade de dias após o transplante não houve diferença significante entre as técnicas, indicando que podem ser aplicadas para detecção precoce de infecção ativa pelos Herpesvírus Humano. Conclusões: As técnicas permitiram aumentar as possibilidades de estudos moleculares a serem realizados em amostras clínicas no laboratório e identificar precocemente os pacientes com maior risco de desenvolver doença por herpesvírus após o transplante, favorecendo a utilização de drogas antivirais somente nestes casos Abstract: Introduction: Human herpesviruses are an important group can cause infections in immunocompromised patients and transplanted in general. Specifically in patients undergoing transplantation of hematopoietic stem cells, the members of the Herpesviridae family have been associated with the occurrence of high rates of morbidity and mortality. Currently, molecular methods of detection and quantification of infectious agents have been widely implemented in routine laboratories in order to minimize the impacts and prevent clinical manifestations caused by herpesviruses. Objectives: This study was standardized and optimized techniques Consensus-Degenerate Hybrid Oligonucleotide Primer in Nested-PCR format (CODEHOP NPCR) for the detection of human herpesvirus subfamilies and Human Herpesvirus Panel in nested PCR Touchdown format (TD NPCR) to detect the genome of the species of herpesviruses in plasma samples of patients transplanted hematopoietic stem cells and, subsequently, both techniques were evaluated from the comparison with the NPCR technique already established in the laboratory, used as a reference pattern. Results: From the optimization of CODEHOP NPCR technique was able to detect the three subfamilies of herpesviruses in positive control samples and the samples studied, and the comparison with the NPCR used as reference standard indicated that there is a moderate correlation between the technical and accuracy above 80%. Through the TD NPCR, all species could be amplified by this technique optimized and, the comparison with the reference standard technique, considerable excellent concordance was obtained for the different species, whereas the accuracy remained above 90%. By comparing the positivity median days after transplantation there was no significant difference between the techniques, indicating that can be applied for early detection of active infection by Human Herpesvírus. Conclusions: The techniques have increased the possibilities for molecular studies to be conducted in clinical samples in the laboratory and the early identification of patients at higher risk of developing disease herpesvirus after transplantation, favoring the use of antiviral drugs only in these cases Mestrado Clinica Medica Mestra em Ciências 2014/16244-9 FAPESP