Disserta????o
Desenvolvimento de processo de fermentacao em biorreator para producao de prolactina humana secretada no espaco periplasmico de Escherichia coli
Development of the fermentation process in bioreactor for the production of human prolactin secreted in the periplasmic space of Escherichia coli
Registro en:
10.11606/D.85.2008.tde-07072009-152955
Autor
OLIVEIRA, TAIS L. de
Resumen
A Prolactina (PRL) ?? um dos horm??nios mais vers??teis em termos de a????o biol??gica. Sua a????o mais conhecida est?? relacionada com o est??mulo da lacta????o e regula????o do crescimento e da diferencia????o da gl??ndula mam??ria; tamb??m apresenta importante aplica????o diagn??stica. Somando os crescentes estudos sobre suas poss??veis aplica????es terap??uticas, fica cada vez mais not??ria a necessidade da obten????o desse horm??nio puro, biologicamente ativo e na sua forma aut??ntica.O objetivo fundamental desse projeto foi a produ????o de hPRL em escala laboratorial a partir de bact??rias (E.coli) modificadas geneticamente, utilizando um sistema de express??o baseado no promotor Lambda () PL, o mesmo utilizado com sucesso em nosso laborat??rio na express??o do hGH. Descrevemos nesse trabalho um processo de cultivo em biorreator, onde n??o foi utilizado o repressor cIts, uma prote??na termo-sens??vel que usualmente ?? utilizada para inibir o funcionamento do promotor PL durante crescimento a 30??C. O processo de cultivo apresenta basicamente tr??s etapas: na primeira etapa o crescimento ?? realizado sem adi????o cont??nua de nutrientes (cultivo em batch), na segunda etapa ocorre adi????o cont??nua de nutrientes e carboidrato (cultivo em fed-batch) e na ??ltima etapa ?? realizada a ativa????o, caracterizada pelo aumento da temperatura mantendo-se a adi????o de nutrientes e carboidrato. Esse processo de fermenta????o r??pido e flex??vel, com dura????o m??dia de 20 horas, permitiu obter uma biomassa final correspondente ?? densidade ??ptica de aproximadamente 30 A600nm (unidades ??pticas de absorb??ncia em 600nm) e com uma express??o da ordem de 1g de hPRL mL-1 A600 -1, as mais altas j?? relatadas para secre????o de prolactina no espa??o peripl??smico. A hPRL monom??rica foi purificada e caracterizada por m??todos f??sico-qu??micos e biol??gicos, os quais confirmaram a sua atividade biol??gica e imunol??gica, o seu correto processamento e uma massa molecular relativa (Mr) de 22.906. Dissertacao (Mestrado) IPEN/D Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP