Dissertação de mestrado
Estudo das alterações fenotípicas e do perfil de ativação de células B-1 estimuladas por Leishmania (Leishmania) amazonensis e por vesículas extracelulares do parasita
Fecha
2021Autor
Reis, Natasha Ferraz De Campos [UNIFESP]
Institución
Resumen
B-1 cells are a subtype of B lymphocytes with ability to produce natural and inducible immunoglobulins, cytokines and chemokines. Our lab showed that L.amazonensis promastigotes were phagocyted by B-1 cells, in vitro and in vivo, but some aspects of B-1 cells activation by Leishmania parasites are not completely understood. It has been shown that different Leishmania species can released extracellular vesicle (EVs) and these vesicles have an importante role in parasite-host relation. Herein, we evaluated the expression of myeloid and lymphoid genes, Toll-like receptors (TLRs), activation markers, NO and ROS productions in B-1 cells after in vivo contact with the parasite or their EVs. Total peritoneal cells were collected after 24 or 48 hours of intraperitoneal stimulating with L.amazonensis promastigotes or EVs. B-1 cells from unstimulated mice were used as control. CD19+CD23- cells were gated and NO and ROS expression were analyzed by flow cytometry. After 24 or 48 hours of infection a significant decrease in NO production were detected in B-1 cells from infected group, as compared to unstimulated animals. For ROS production, we observed a significant decrease in their production only after 48 hours of infection. Purified B-1 cells were used to analyze the expression of arginase, TLRs, myeloid and lymphoid genes. We detected higher expression in TLR2, TLR6, TLR9 and arginase gene in mice intraperitoneally stimulated for 24 and 48 hours with the parasite. For the B-1 cells stimulated with EVs we observed an increase in the TLR-9 expression. EVs and parasites led to a substantial increase in expression of myeloid genes in B-1 cells, suggesting the differentiation of these cells to a myeloid profile. Thus, our study suggests that L.amazonensis promastigotes stimulated the differentiation of B-1 cells to a myeloid profile with M2 feature and the EVs released by the parasite also modulate the B-1 cells profile. Células B-1, um subtipo de linfócitos B, são as principais fontes de anticorpos naturais, fagocitam, apresentam antígenos e liberam citocinas que podem modular outras células do sistema imunológico. No entanto, alguns aspectos da ativação dessas células após contato com agentes patogênicos ainda não estão completamente esclarecidos. Este trabalho teve por objetivo avaliar a ativação de células B-1 provenientes de animais intraperitonealmente infectados com promastigotas de Leishmania (Leishmania) amazonensis ou estimulados com vesículas extracelulares (EVs) liberadas pelo parasita. Foram avaliados os seguintes parâmetros: produção de NO e ROS; expressão de arginase (ARG); expressão de receptores de ativação celular (CD80, CD86, CD40), F4/80 e MHC II; receptores do tipo toll (Toll like receptors – TLRs); expressão de IL-6, IL-10 e TNF-α; expressão de genes de comprometimento linfoide e mieloide. Células B-1 peritoneais de animais não infectados/estimulados foram usados como controle. Nossos resultados mostraram que a infecção por L. amazonensis não estimulou a expressão de CD40, CD80, CD86, F4/80 e MHC II em células B-1, mas foi observada diminuição significativa na produção de NO e ROS. A infecção induziu expressão de arginase significativamente maior nas células B-1, mas a estimulação com EVs levou a diminuição na expressão desse gene. TLR-2 e TLR-6 tiveram expressão significativamente maior em células B-1 de camundongos estimulados intraperitonealmente com o parasita. A expressão de TLR-9 foi maior em animais infectados ou estimulados por 48 h com EVs. Interessantemente, o estímulo intraperitoneal com L. amazonensis levou a aumento substancial na expressão de genes de comprometimento mieloide. Assim, nosso estudo sugere que os parasitas ou EVs modulam de forma diferente a ativação e diferenciação das células B-1.