Tesis Doctorado
Identificación y caracterización del gen pma1 de brettanomyces bruxellensis y su relación con el mantenimiento del ph intracelular en presencia del acido p-cumárico
Autor
Godoy-Olivares, Liliana del Pilar
Institución
Resumen
Los ácidos hidroxicinámicos (AHC) presentes en vinos poseen propiedades
antimicrobianas que afectan el desarrollo de numerosos microorganismos. Un
mecanismo de respuesta a la toxicidad de éstos ácidos descrito en
Saccharomyces cerevisiae, consiste en el bombeo de protones hacia fuera de
la célula mediante la enzima Pma1p. Esto contrarresta la disminución del pH
interno causado por la disociación de éstos ácidos en el citoplasma. Con el fin
de identificar y caracterizar el gen PMA1 de Brettanomyces bruxellensis y su
relación con el mecanismo de detoxificación de ácido p-cumárico (ApC), se
evaluó el crecimiento de la cepa L1359 en presencia de distintas
concentraciones de AHC, observándose un aumento en la duración de la fase
lag, siendo éste dosis dependiente. De igual forma se observó una reducción en
la velocidad específica de crecimiento. Asimismo se observó una disminución
del pH extracelular cuando la cepa fue crecida en presencia de ApC,
coincidiendo esto con el máximo de actividad Pma1, lo que sugiere que la
disminución en el pH es producida por la expulsión de protones al medio
extracelular.
Por otro lado, mediante análisis bioinformáticos se determinó la secuencia del
gen PMA1 de B. bruxellensis. Esta secuencia presenta un 75% de identidad con
genes que codifican para proteínas similares en otras especies de levaduras.
Se evaluó la expresión del gen PMA1 en ausencia y presencia de ApC y se
observó que la expresión de éste fue mayor en la cepa crecida en presencia de
ApC. Además, la mayor expresión del gen ocurre durante la fase lag, sugiriendo
que el mecanismo de resistencia de B. bruxellensis a los efectos tóxicos de ApC
mediado por PMA1 es un mecanismo adaptación temprana Finalmente se
determinó mediante mutagénesis sitio dirigida que el sitio de unión del factor
transcripcional Msn4 presente en promotor del gen PMA1 es relevante para su
expresión. PFCHA-Becas Doctorado en Ciencia y Tecnología de los Alimentos 100p. PFCHA-Becas TERMINADA