Tesis Doctorado
Modulación del fenotipo y función de las células dendríticas de ratón por el acido all-trans retinoico
Autor
De Calisto-Contreras, Jaime Bolivar
Institución
Resumen
Las células dendríticas (DC) asociadas a la mucosa intestinal (GALT-DC), tales como las células dendríticas de la lámina propia o las DC del linfonodo mesentérico (MLN-DC), son un factor clave en la regulación del balance entre linfocitos T reguladores Foxp3+ y linfocitos pro-inflamatorios Th17. Además, ellas inducen eficientemente la expresión de los receptores de homing ?4?7 y CCR9 en células T y B, lo que les confiere a los linfocitos un tropismo preferencial por la mucosa intestinal.Todas estas propiedades de las GALTD-DC, son atribuidas a su exclusiva habilidad de producir ácido retinoico (RA) a partir de su precursor la vitamina A. Dada la importancia que tienen las GALT-DC en la regulación de una respuesta inmune intestinal, una pregunta clave, y que no ha sido resuelta aún, es cómo estas células adquieren la capacidad de sintetizar el RA. Se ha documentado que la mucosa intestinal del intestinodelgado de los mamíferos, es uno de los pocos tejidos en el cual se produce RAcontinuamente. Además, recientemente se describió que los precursores de las DC de la lámina propia, provenientes de la médula ósea, terminan su proceso dediferenciación en ese tejido. Por lo tanto, es muy probable que el RA module alguna de las propiedades inherentes a las GALT-DC, tal como la expresión de las enzimas involucradas en su propia síntesis (RALDH). En este trabajo, utilizando el modelo murino como aproximación experimental, se muestra que DC generadas in vitro en presencia de concentraciones fisiológicas de RA (1-100 nM), tienen una menor expresión de los marcadores clásicos de maduración: MHC-11, CD80 y CD86,comparadas con DC control. Además, este fenotipo inmaduro se mantuvo intacto,incluso después de la exposición a estímulos patogénicos. Interesantemente, las DC generadas en presencia de RA no produjeron la citoquina pro-inflamatorias IL-12 en respuesta a lipopolisacárido. Sin embargo, se observó un aumento en la producción deIL-6, comparado con las DC control. Por otro parte, se demostró que el RA es capaz de inducir específicamente la expresión del gen que codifica para la enzima RALDH2 (Aldh1a2), tanto en DC generadas in vitro, como en DC aisladas de linfonodos no asociados a la mucosa intestinal. Consistente con estos resultados, se encontró un mayor porcentaje de células con actividad enzimática RALDH (determinado mediante el ensayo de Aldefluor®) en las DC tratadas con RA, lo cual sugiere una mayor producción de RA por parte de estas células. lmportantemente, este fenómeno ocurrió tanto in vitro como in vivo, en DC aisladas de ratones tratados oralmente con RA. Además, utilizando un modelo murino de deficiencia aguda de vitamina A (y por ende de RA), sedemostró que las GALT-DC de estos animales tienen una menor expresión del mRNA RALDH2 y una menor actividad enzimática RALDH. Lo que a su vez, fue rescatado casi totalmente por el tratamiento oral con RA. Sugiriendo que el RA es necesario y suficiente tanto in vivo como in vitro, para la expresión y actividad de las enzimas involucradas en su propia síntesis. Finalmente, la purificación de la fracción de GALT-DCcon actividad RALDH (células Aldefluor® positivas), permitió correlacionar directamente la actividad RALDH con la capacidad de inducir los receptores de homing a intestino ?4?7 y CCR9 en linfocitos T. El cual es un proceso que requiere de la producción de RA por parte de las DC.En conjunto estos resultados muestran que, el RA modula el fenotipo yfunción de las OC, en donde el RA sería necesario y suficiente para conferirle a las GALT-DC la capacidad de sintetizar esta molécula. De esta forma, el mismo RA producido por las GALT-DC, actuando de manera autocrina, sería suficiente para mantener la expresión de las enzimas involucradas en su propia síntesis mediante un mecanismo de retroalimentación positiva. PFCHA-Becas Doctor en Ciencias Mención Biología Molecular y Neurociencias 82p. PFCHA-Becas TERMINADA