Los ciclótidos son péptidos cíclicos de origen vegetal con 28-37 residuos de aminoácidos, tienen diversas actividades biológicas, incluyendo uterotónica, anti-VIH, antimicrobiana e insecticida. Los ciclótidos han sido aislados principalmente de tres familias de plantas, Violaceae, Rubiaceae y Cucurbitaceae. Dado que Colombia es un país megadiverso en flora y la familia Rubiaceae está ampliamente distribuida en su territorio, se planteó como objetivo analizar la naturaleza de los ciclótidos y la actividad antimicrobiana Guettarda crispiflora (Rubiaceae), de la cual no existen reportes en la literatura sobre la evaluación fitoquímica, las actividades biológicas ni la naturaleza de sus ciclótidos. En este estudio se obtuvieron por maceración los extractos de diclorometano y metanol de G. crispiflora. El extracto metanólico fue purificado removiendo los taninos con poliamida y posteriormente las sales y polisacáridos fueron eliminados al utilizar un soporte cromatográfico de fase reversa (C18). La purificación final se realizó por cromatografía líquida de alta eficiencia preparativa. La presencia de los péptidos fue evidenciada por electroforesis en geles de poliacrilamida con dodecilsulfato de sodio y tricina, asi como por cromatografía en capa delgada. Los péptidos obtenidos fueron parcialmente caracterizados por espectrometría de masas, detectándose 11 cyclotides. Adicionalmente, los extractos crudos y las fracciones cromatográficas obtenidas de G. crispiflora fueron evaluados contra las cepas de Bacillus subtilis, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa y Staphylococcus aureus, por el método de difusión en agar, los cuales no presentaron actividad antimicrobiana a las concentraciones evaluadas.