Anticuerpos de llama de dominio único como inhibidores intracelulares de una toxina bacteriana
Single-domain antibodies as intracellular inhibitors of a bacterial toxin
| dc.contributor | Goldbaum, Fernando A. | |
| dc.creator | Alzogaray, Vanina A. | |
| dc.date | 2010 | |
| dc.date.accessioned | 2017-01-24T19:43:31Z | |
| dc.date.available | 2017-01-24T19:43:31Z | |
| dc.identifier | http://digital.bl.fcen.uba.ar/gsdl-282/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=tesis&d=Tesis_4687_Alzogaray | |
| dc.identifier | http://repositoriouba.sisbi.uba.ar/gsdl/cgi-bin/library.cgi?a=d&c=aextesis&d=HASHc35b6a1363a0eea12cd191 | |
| dc.identifier.uri | http://repositorioslatinoamericanos.uchile.cl/handle/2250/74115 | |
| dc.description | Los camélidos poseen anticuerpos que carecen de cadena liviana y de una fracción de la cadena pesada. El sitio de unión al antígeno está formado por el dominio variable de la cadena pesada, denominado VHH. Su largo CDR3 resulta especialmente apto para la unión a epitopes cóncavos, como los sitios activos enzimáticos. Salmonella tyhimurium es una bacteria intracelular patógena que posee una ADP‐ribosiltransferasa denominada SpvB, esencial para la virulencia. SpvB induce la depolimerización de los filamentos de actina, llevando a la muerte celular. En este trabajo de Tesis, mostramos la generación de una biblioteca de expresión en fagos, a partir de linfocitos de llamas inmunizadas con el dominio catalítico de SpvB, para obtener VHHs que reconocen a SpvB e inhiben su actividad enzimática. Los clones de VHHs anti‐SpvB se secuenciaron y clasificaron de acuerdo al CDR3. Fueron seleccionados 5 clones, los cuales se expresaron y purificaron como proteína recombinante. Mediante dos ensayos independientes, mostramos que estos VHHs inhiben a SpvB. Uno de los ensayos nos permitió cuantificar la relación molar VHH:SpvB para lograr un 100% de inhibición identificando así a VHH5, que inhibe a SpvB en relación equimolar. Se transfectaron macrófagos con VHH5 y se infectaron con Salmonella typhimurium. El análisis de las células por microscopía de fluorescencia mostró claramente que VHH5 expresado en el interior celular, tiene la capacidad de proteger su citoesqueleto. Por otro lado, mediante la translocación de SpvB al citoplasma, realizamos un ensayo en células transfectadas con VHH5 para discriminar el efecto de SpvB de otros factores de virulencia. Los resultados mostraron que la expresión intracelular de VHH5 protege el citoesqueleto del efecto citopático causado por SpvB. Estos resultados constituyen una prueba de concepto sobre el uso de anticuerpos de dominio único de llama para la inhibición de enzimas intracelulares. | |
| dc.format | text; pdf | |
| dc.language | Español | |
| dc.publisher | Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Universidad de Buenos Aires | |
| dc.subject | Química /Química Biológica | |
| dc.subject | ANTICUERPOS DE DOMINIO UNICO | |
| dc.subject | INTRABODIES | |
| dc.subject | INHIBIDORES ENZIMATICOS | |
| dc.subject | SALMONELLA | |
| dc.subject | SPVB | |
| dc.title | Anticuerpos de llama de dominio único como inhibidores intracelulares de una toxina bacteriana | |
| dc.title | Single-domain antibodies as intracellular inhibitors of a bacterial toxin | |
| dc.type | Tesis |