Tesis
Sistemas lipidicos microestructurados como transportadores de compuestos activos
Fecha
2015-09-14Autor
Villa García, Matilde
Institución
Resumen
El presente trabajo muestra la importancia que tienen los ingredientes activos derivados de fuentes naturales en la salud, enfatizando en su biodisponibilidad en un lugar especifico (colon) y aplicación en líneas celulares de cáncer de mama con el uso de una matriz lipídica-liposoma elaborada con dos técnicas deferentes como métodos de protección ante los efectos deletéreo.
Los liposomas son vesícula esférica con una membrana compuesta de una doble capa de fosfatidilcolina y colesterol, estos se obtuvieron usando el método Bangham y evaporación en fase reversa (REVs) posteriormente se caracterizaron en base al diámetro, potencial-ζ y microestructura. Una vez obtenidos, se sometieron a un proceso de pegilación el cual consistió en la adición de un polímero hidrofílico (polietilenglicol- PEG) a diferentes concentraciones, la proporción adecuada de PEG se determino por medio de potencial ζ y se analizo su efecto sobre el tamaño del liposoma.
Por otra parte los ingredientes activos (IA), β-caroteno y antocianinas del zarzamora se caracterizaron por medio de cromatografía liquida de alta eficiencia (HPLC). Una vez obtenidos los espectros se cargaron los liposomas con los IA y por HPLC se determino su eficiencia de atrapamiento.
Una vez conocida la capacidad de atrapamiento de β-caroteno (0.09 mg/ml) y antocianinas (3.0 μl/ml) se procedió a realizar la carga del los liposomas pegilados, su posterior caracterización se realizo en base a su tamaño y potencial-ζ.
Los liposomas obtenidos por el método Bangham obtuvieron un tamaño promedio de 104.9 nm y un potencial ζ de -57.3 mV, con la adición del polímero (0.25 ml) y el IA el tamaño y el potencial se modificaron (95.40 nm, -42.4.5 Mv para el β-caroteno y 95.40 nm, -42.4 para las antocianinas) como era de esperarse. Con respecto a los liposomas por el método REVs el tamaño y potencial ζ con el IA fue de 109. 7 nm y un potencial de -42.5 mV respectivamente.
Las microestructuras por TEM mostraron en ambos casos liposomas con curvaturas definidas y se podía apreciar claramente la presencia del PEG adherido a la superficie del liposoma. Con respecto a la estabilidad a condiciones de almacenamiento, a temperatura ambiente los liposomas Bangham con ambos IA mostraron ser más estables dentro de los primeros 7 días, en cambio los liposomas REVs con los IA fueron estables a partir de los 17 días. En ambos casos el almacenamiento a temperatura de refrigeración incremento ligeramente el tamaño de los liposomas.
Con respecto a la liberación en fluidos gastrointestinales, ambos liposomas tuvieron una liberación notable del IA a partir de la presencia de las enzimas intestinales, específicamente la lipasa, por otra parte la liberación in vitro usando membranas de diálisis fue observada notablemente la liberación del IA. La aplicación en líneas células de cáncer de mama los liposomas que ejercieron un mayor efecto en inhibir a las células cancerosas fueron los liposomas REVs usando una concentración de 10 μl/ml sobre los otros tres tipos de liposomas.
Con estos datos podemos concluir que el uso de liposomas protege la estabilidad en condiciones de estrés durante su elaboración y transito a través del tracto gastrointestinal, asegurando que los IA son liberados en un lugar específico. Además con respecto a su aplicación es notable que el efecto del compuesto hidrofílico causó una inhibición en células tumorales. ABSTRACT
This work shows the importance of active ingredients like naturals resources on the health, stand up their bioavailability in specific cite (the colon) and application in cell lines of cancer breast by means of polymeric matrix fat-liposome made with two different techniques like protection method between deleterious effects.
The liposomes are spheres vesicles with a membrane made from a couple of layer as fhosphatidylcholine and cholesterol. These were obtained from Bangham method and reverse phase evaporation (REVs), and then were characterized according their diameter, zeta potential and microstructure. Once obtained, the liposomes were treated with pegylation treatment, which consisted in the addition of an hydrophobic polymer (polyethylenglycol - PEG) on different concentrations, the proper proportion of PEG was determined by ζ potential and the affection on the liposome size was evaluated.
On the other hand, the active ingredients (IA), β- carotene and anthocyanin of blackberry were characterized by means of High-Performance Liquid Chromatography (HPLC). Once obtained the spectrum, the liposomes were added the IA and the entrapment efficiency was determined by HPLC.
Once known the entrapment efficiency of β-carotene (0.09 mg/ml) and anthocyanin (3.0 μl/ml) were preceded to work in the load of pegilated liposomes, their characterization was realized according their size and zeta potential.
The liposomes obtained by Bangham method, had a size 104.9 nm and -57.3 mV in the zeta potential, with the addition of the polymer (0.25 ml) and IA, size and zeta potential were changed (95.40 nm to -42.4.5 Mv on the case of β-carotene, and 95.40 nm to -42.4 by the anticianin) as expected. Regarding the liposomes from REVs method, the size and zeta potential with IA were of 109.7 nm and -42.5 mV respectively. The microstructures by TEM show that in both cases liposomes with defined curvatures and we can see the PEG adhered on the liposome surface. Regarding the stability in storage condition, we find that the in 25 °C of temperature the liposomes Bangham with both IA were more stable on the first seven days, regarding the REVs liposomes with IA were more stables from the first seventeen years. In both cases, storage condition with cooling, the liposomes increased in size.
Regarding the released of gastrointestinal fluids, both liposomes had a noticeable released of IA with intestinal enzymes, specifically the lipase. On the other hand released in vitro with membrane of dialysis was observed a release noticeable of IA. The application on cell lines in cancer breast, liposomes that had a high effect by inhibit the cell cancer were the REVs liposomes when was used a concentration of 10 μl/ml on the three different liposomes.
With this work, we conclude that the use of liposomes improved the stability in stress conditions during their elaboration and pass between gastrointestinal tract, with a specific cite. Moreover regarding their application, the hydrophilic compound origin an inhibition of cell tumors.