Thesis
Generación de un modelo experimental de microambiente hematopoyético
Autor
Bello Rodríguez, Carlos Alejandro
Institución
Resumen
Resumen
Las células madre (CM) son células con capacidad de autorenovación, proliferación y diferenciación a células de diferentes linajes. Las CM hematopoyéticas (CMH) constituyen un tipo de CM con capacidad de diferenciarse a todos los linajes celulares de la sangre; proceso conocido como hematopoyesis y mediante el cual se mantiene la homeostasis celular en la sangre. En el adulto, el proceso de hematopoyesis ocurre principalmente en la médula ósea (MO), en un microambiente hematopoyético (MH) o nicho. Sin embargo, en ciertas condiciones patológicas o experimentales, la hamatopoyesis puede generarse en tejidos y órganos diferentes a la MO, en un proceso conocido como hematopoyesis extramedular (HE). El hígado es uno de los órganos en donde puede ocurrir HE. Para que se produzca la HE es necesario que existan microambientes que favorezcan la promoción de sobrevida, proliferación y diferenciación de CMH. Estos microambientes son conocidos como microambientes hematopoyéticos (MH) y están constituidos por células y proteínas del estroma de la MO. Con relación al componente celular de los MH, es bien conocido que las células estromales mesenquimales juegan un papel fundamental para promover la hematopoyesis a partir de las CMH. Así mismo, es bien conocido que el colágeno es un componente fundamental de los MH. Los MH pueden ser simulados in vitro e in vivo mediante la combinación de elementos celulares con matrices o soportes biológicos. En el presente trabajo, se emplearon los conocimientos de hematopoyesis, HE y de modelos tridimensionales para desarrollar un modelo tridimensional (3D) constituido por CMH de ratón, células estromales mesenquimales (CEM) humanas y microperlas de colágeno (MC), todo lo cual fue incluido en un coagulo de plasma rico en plaquetas (PRP). Se realizaron estudios de viabilidad y funcionalidad de las CMH en cultivos in vitro del complejo 3D, PRP/CMH/CEM/MC. Así mismo, coágulos del complejo PRP/CMH/CEM/MC fueron implantados a nivel subcutáneo en ratones y posteriormente se evaluó la generación de células sanguíneas en dicho implante. Los estudios funcionales de hematopoyesis, tanto in vitro como in vivo, fueron investigados mediante ensayos clonogénicos en medio semisólido (metilcelulosa) suplementado con citoquinas hematopoyéticas, estudios morfológicos y análisis fenotípicos mediante citometría de flujo. Nuestros resultados muestran que el modelo 3D de PRP/CMH/CEM/MC es un sistema en el cual se genera hematopoyesis tanto in vitro como in vivo.
Palabras clave: nicho, células madre hematopoyéticas, hematopoyesis, hematopoyesis extramedular, células estromales mesenquimales Bello Rodríguez,Carlos Alejandro(2018)Generación de un modelo experimental de microambiente hematopovético.Trabajo de Grado presentado ante la Universidad Central de Venezuela para optar por el Título de Licenciado en Biología