Trabajo de grado - Pregrado
Implementación del ensayo MTT (bromuro de 3-(3,4 -dimetiltiazol-2-il)-2,5- difeniltetrazolio) en líneas celulares tumorales y determinación de la viabilidad celular de análogos de ácidos nucleico
Fecha
2017Registro en:
instname:Universidad de los Andes
reponame:Repositorio Institucional Séneca
Autor
Melo Torres, Carol Paola
Institución
Resumen
Los ensayos de viabilidad celular y en general las aproximaciones in vitro son uno de las primeros pasos que se realiza para evaluar los efectos de moléculas que podrían postularse como nuevas drogas. Por lo tanto, factores como la precisión y la reproducibilidad de los resultados obtenidos por medio de estos ensayos son cruciales para la aplicación de estos ensayos in vitro. En éste trabajo de grado, el objetivo principal fue la implementación del ensayo MTT, uno de los ensayos estándares para evaluación in vitro de viabilidad celular, en las líneas celulares tumorales HCT 116 y K-562; concomitante a éste proceso, se quería evaluar los efectos sobre la viabilidad celular de unos derivados del núcleo pirazolo[1,5-a]pirimidina. Estos derivados se escogieron para evaluar el efecto de tres sustituyentes, hidrógeno, cloro y metoxilo en dos anillos aromáticos posicionados en la posición 2 y 7 del núcleo pirazolo[1,5-a]pirimidina sobre la viabilidad celular. Previo a la implementación del ensayo se caracterizó el crecimiento de las líneas células y se determinó una densidad celular de 1000 células por pozo como apropiada para el sistema del ensayo MTT. Posterior a esto optimizaron los parámetros del ensayo MTT, determinando que el ensayo no pudo ser implementado con la línea K-562 por su naturaleza de suspensión que causaba una extracción de los cristales de formazán previo a la lectura del ensayo y posible citotoxicidad del reactivo MTT. Por otro lado, con la línea HCT-116 fue posible determinar por medio de análisis estadísticos de las réplicas realizadas reproducibilidad en el tiempo y se detectó que el grupo metoxilo en la posición 2 del núcleo pirazolo[1,5-a]pirimidina tiene un efecto en la viabilidad celular causando que menos del 45% de la población sea viable. En particular, la molécula JCC-67 (2-(4-metoxifenil)-7-fenilpirazolo[1,5-a]pirimidina), causó una viabilidad celular del 26% y estudios preliminares de su EC50 podrían indicar propiedades farmacológicas Cell viability assays and in general in vitro approximations are one of the first steps that is made to evaluate the effects of molecules which can be proposed as new drugs. Therefore, factors as precision and reproducibility of the results obtained through these assays are vital for the application of these in vitro assay. In the present grade project, the principal objective was the implementation of the MTT assay, the gold standard for the in vitro evaluation of cell viability, on the cancerous cell lines HCT 116 and K562; concurrent with this process, it was wanted to evaluate the effects of derivatives from the nucleus pyrazolo[1,5-a]pyrimidine over cell viability on the cancerous cell lines. Previous to the assay implementation it was characterized the growth of the cell lines and a density of 10000 cells per well was determined as appropriate for the system of the MTT assay. Subsequently to this, the MTT assay parameters were optimized, first it was determined the inability to implement the assay on the K-562 cell line due to its suspension nature that caused and extraction of the formazan crystal previous to the assay lecture, and also due to a possible cytotoxicity of the MTT reagent. On the other hand, with HCT-116 cell lines it was possible to determine through statistical analysis reproducibility of replicates over time and it was detected that the methoxyl group at position two on the nucleus pirazolo[1,5-a]pyrimidine has an effect on cell viability causing that less of the 45% of the cells were viable. In particular, the molecule JCC-67 (2-4(methoxyphenyl)-7-phenylpirazolo[1,5-a]pyrimidine), caused a cell viability of 26% and preliminary studies of its EC50 could indicate promissory pharmacological properties