Tesis Doctorado
Mutaciónes en el gen atmy su asociación con cáncer de mama en población Chilena
Autor
Jara-Sosa, Lilian
Universidad de Chile
Institución
Resumen
El cáncer de mama es el más común en mujeres en el mundo. Se ha estimado que 1 de cada
8 mujeres desarrollará cáncer durante el curso de su vida. Actualmente se postula que el principal
factor de riesgo para el cáncer de mama es la predisposición genética, responsable del 5-15% del
total de los casos/ Sólo el 15-20% de los casos de cáncer de mama familiar son portadores de
mutaciones en los genes BRCA 1 y BRCA2. Estos resultados sugieren que, además de BRCA 1 y
BRCA2, existen otros genes que contribuyen a la susceptibilidad del cáncer de mama familiar. A TM es
uno de los genes candidatos involucrados en la susceptibilidad al cáncer de mama. ya que junto a
BRCA 1 y BRCA2 participa en la respuesta celular a las fracturas de doble hebra del DNA.
En la presente tesis se planteó la siguiente hipótesis: En la población chilena existen variantes
de secuencia en el gen A TM que tienden a asociarse positivamente con el desarrollo de cáncer de
mama. Estas mutaciones disminuyen la eficiencia de la respuesta celular a las fracturas de doble
hebra del DNA en los individuos portadores.
Para poner a prueba esta hipótesis se realizó. en 126 casos de cáncer de mama familiar y/o
diagnóstico temprano no portadores de mutaciones en BRCA 112, un tamizaje de mutaciones en la
secuencia codificante completa y regiones intrónicas circundantes del gen A TM. Se identificaron 1 O
variantes de secuencia, dos de ellas correspondieron a mutaciones missense (378T>A y 5557G>A) y
8 correspondieron a variantes intrónicas (IVS4+36insAA, IVS 17 -56G>A. IVS24-9deiT, IVS25-12insA,
IVS38-15G>C, IVS38-8T>C, IVS47-65G>C e IVS48-69insATT).
De las mutaciones detectadas, se seleccionaron las variantes IVS24-9deiT, IVS38-8T>C y
5557G>A para analizar su asociación con cáncer de mama. Estas variantes se genotipificaron en 126
casos de cáncer de mama familiar y en 200 controles sanos sin antecedentes familiares de cáncer. La
frecuencia del alelo IVS38-8C fue significativamente mayor en casos (0,1 O) que en controles (0,06)
(0R=3,00 [IC95% 1,09- 8,21). p=0,025). La frecuencia de heterocigotos para IVS38-8T>C fue mayor
en casos (8,7%) que en controles (3,0%) (0R=3,09 [IC95% 1,11 - 8,59)) , siendo la diferencia
estadísticamente significativa (p=0,025). No hubo diferencias significativas en las frecuencias alélicas
y genotípicas en casos y controles para las variantes IVS24-9deiT y 5557G>A. Al realizar las distintas
combinaciones entre los genotipos de las tres variantes analizadas se detectaron 3 genotipos
compuestos distintos: homocigoto normal para las tres variantes (T/T, T/T, G/G), heterocigoto para
IVS24-9deiT y 5557G>A y homocigoto normal para IVS38-8T>C (TI(-T), T/T, G/A), y heterocigoto para
las tres variantes analizadas (T/(-T), TIC. G/A). El genotipo compuesto TI(-T), TIC. G/A tiene una
frecuencia significativamente mayor en casos (8,7%) respecto a controles (3,0%) (p=0,02, 0R=3,19
[IC 95% 1,16- 8,89]). Se infirieron sólo tres haplotipos a partir de los datos de genotipos de ambos
grupos analizados: T-T-G, (-T)-T-A, y (-T)-C-A (IVS24-9deiT, IVS38-8T>C y 5557G>A,
respectivamente), sugiriendo un estrecho desequilibrio de ligamiento entre las tres variantes
(coeficiente de desequilibrio de ligamiento, D'= 1 ). La frecuencia del haplotipo (-T)-C-A fue mayor en casos (0,04} en comparación a controles (0,02) (0R=3,03 [IC 95% 1,1 O- 8,45)). No hubo diferencias
significativas para los otros dos haplotipos. En conjunto, estos resultados sugieren que los portadores
del genotipo compuesto de riesgo T/{-T), T/C, G/A tienen un más riesgo de desarrollar cáncer de
mama 3,2 veces mayor en comparación a los no portadores.
Para apoyar la asociación propuesta se analizó la funcionalidad de ATM en cultivos de
linfocitos de 6 casos de cáncer de mama portadores del genotipo compuesto de riesgo y de 5
controles sanos sin antecedentes de cáncer de mama no portadores del genotipo compuesto de
riesgo. Para ello se estudiaron tres variables: 1) la frecuencia de fracturas cromatídicas, 2) el
porcentaje de lesiones reparadas en la fase G2 del ciclo celular, y 3) la duración de la fase G2. Los
casos presentaron mayor frecuencia de fracturas cromatídicas (3,0 ± 1,0) con respecto a controles
(1,6 ± 0,6} (p=0,03). La frecuencia de fracturas cromatídicas radioinducidas también fue mayor en
casos (23,6 ± 6,3) que en controles {16,2 ± 3,8} (p=0,04}. El porcentaje de lesiones reparadas en G2
(% LRG2) en cultivos en condición basal fue de 42,7% en casos y de 77,4% ± 9,2 en controles. En
cultivos tratados con rayos X el% LRG2 fue menor en casos (69,2 ± 6,1) respecto a controles (79,7 ±
6,0} (p=0,04}. La duración media de G2 fue de 5,5 ± 0,2 horas en casos, y de 5,4 ± 0,1 horas en
controles (p=0,50). Luego de irradiación, la duración de G2 fue de 7,2 ± 0,7 horas en casos versus
6,5 ± 0,5 horas en controles (p=O, 13). Estos resultados estan de acuerdo a lo observado en células
de heterocigotos para mutaciones en A TM, e indican que el checkpoint G2iM opera normalmente en
los portadores del genotipo compuesto de riesgo en A TM frente a daño endógeno y radioinducido: y
que la alta frecuencia de fracturas cromatídicas basales y radioinducidas observada en los portadores
del genotipo compuesto de riesgo en A TM podría ser explicada por una falla en la reparación de
fracturas de doble hebra. De acuerdo a los antecedentes de la literatura, se sugiere que la expresión
del alelo normal en los portadores de las variantes IVS249deiT, IVS38-8T>C y 5557G>A podría ser
suficiente para asegurar la función de ATM en el checkpoint G2/M, sin embargo se ve alterada la
funcionalidad de ATM en la reparación de fracturas de doble hebra del DNA producto de
haploinsuficiencia. Esto explicaría el hecho que los portadores del genotipo compuesto T/(-T), T/C,
G/A posean un mayor riesgo de desarrollar cáncer de mama.