Establecimiento in vitro de células espermatogoniales de Vicugna pacos “alpaca” Ayacucho - 2016

Abstract

El objetivo del presente trabajo fue aislar y cultivar in vitro células espermatogoniales de vicugna pacos “alpaca” durante 15 días a partir de muestras testiculares de animales beneficiados en el Matadero Municipal de Huancavelica, cuyas edades oscilaron de entre 2 y 3 años aproximadamente, el tiempo transcurrido desde la obtención de las muestras hasta el procesamiento en el laboratorio fue de aproximadamente ocho horas. El procesamiento para aislar las células se inició con disgregaciones mecánicas de descapsulación y trituración del tejido testicular y seguidamente sometido a digestión enzimática utilizando cuatro enzimas: colagenasa, tripsina, hialuronidasa y DNAsa I. El promedio de concentración celular obtenido fue de 25,5 x 106 cel/ml y las viabilidades por encima de 93%. Fueron cultivados en multiplacas en medio de cultivo Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM, por sus siglas en inglés) suplementado con antibióticos, en una incubadora de atmósfera húmeda con 5% de CO2. Las variables de estudio fueron las diferentes concentraciones de Suero Fetal Bovino (SFB) al 2,5%, 5%, 10%, 20% y un grupo control al 0%, así mismo dos temperaturas: 32 °C y 38 °C. A los siete días de cultivo el número de células espermatogoniales disminuyeron, y sólo un grupo de ellas se mantenían viables y con indicios de proliferación mediante la formación de pequeñas colonias. Al finalizar los 15 días La condición óptima de cultivo fue a la temperatura de 38 °C con una concentración de SFB al 2,5%, en este se observó el incremento de las colonias de espermatogonias. Concentraciones de SFB altas favorecieron el crecimiento de células somáticas.