La presente investigación tuvo como objetivo evaluar el efecto de dos agentes crioprotectores, Dimetilsulfóxido (DMSO) y Glicerol, sobre el porcentaje de fecundación del erizo peruano Tetrapygus niger, determinando la concentración, tiempo de exposición y tipo de agente crioprotector (CPA) a utilizar posteriormente en la crioconservación de los gametos (esperma y ovocitos), con fines de desarrollo de un banco de germoplasma criogénico. Se usó tratamiento osmótico (KCl) para liberar los gametos y se verificó la calidad. Se ensayaron concentraciones de 0,5, 1, 1,5 y 2 M, tiempos de exposición de 5, 10, 15 y 20 minutos, 3 repeticiones y controles negativos por prueba. Se fertilizó usando 10 µL de solución espermática (10 µL masa espermática con 200 µL de agua de mar microfiltrada esterilizada con luz ultravioleta) y 1000µL de suspensión de ovocitos. Se fijó con formalina tamponada al 10% y se contabilizó el número de huevos fertilizados y no fertilizados, diferenciándolos por la presencia de la membrana de fertilización y/o segmentación del cigoto en 2, 4 y 8 células. Se encontró que el DMSO es mejor CPA que el Glicerol para la criopreservación de esperma y ovocitos con porcentajes de fecundación de 89,9% y 73,8% respectivamente. Se encontraron valores NOEC (concentración a la cual no se observa efecto) y LOEC (concentración más baja a la cual se observa efecto) de 1,5M /2M para esperma y 0,5M /1M para ovocitos con DMSO y de 0,5M/1M con Glicerol para esperma. Se recomienda utilizar estos resultados en ensayos de criopreservación para T. niger