Aislamiento y selección de cultivos nativos de Bacillus sp. productores de amilasas a partir de residuos amiláceos del mercado La Hermelinda, Trujillo - Perú.

Abstract

En el presente trabajo de investigación se procesaron muestras de residuos amiláceos (yuca, papa, camote, olluco y choclo) del mercado La Hermelinda, Trujillo – Perú con el objetivo de aislar y seleccionar cultivos puros de Bacillus sp. con mayor capacidad hidrolítica en agar almidón al 0.1%. Mediante el empleo del lugol, se logró aislar 50 cultivos y seleccionar 05 cultivos bacterianos con mayor halo de hidrolisis en placa. Los cultivos bacterianos aislados fueron reactivados mediante siembra en placas conteniendo agar almidón 0.1% e incubadas a 37°C por 18h, a partir del cultivo joven se preparó una suspensión con solución salina fisiológica estéril, equivalente al tubo N° 3 del nefelómetro de Mac Farland (9.0 x 108 UFC/mL). Se construyeron 05 biorreactores de 1 L de capacidad; con 04 bafles, un motor de 6V y un agitador tipo Rushton a cada uno. En cada biorreactor se colocó 450 mL de caldo almidón 0.1% - buffer fosfato a pH 7.0, suplementado con sales: (NH4)2SO4, CaCl2, luego se agregó 50 mL del inóculo estandarizado y se incubó a temperatura ambiente. Se determinó la producción de amilasas cada 24h por 5 días, extrayendo l0 mL de muestra de cada biorreactor y se centrifugó. Al sobrenadante (extracto enzimático), se cuantificó la cantidad de amilasas producidas en relación al tiempo de incubación, midiendo el almidón residual en espectrofotómetro y se determinó las unidades enzimáticas de amilasas (UA/mL) por el método de Street-Close modificado por Cueva. Con la prueba estadística de ANOVA se demostró que no hubo diferencia significativa (p > 0,05), lo que permite concluir que los cinco cultivos bacterianos evaluados, producen la misma cantidad de enzimas UA/mL en relación al tiempo de incubación.