Descripción de los resultados obtenidos de análisis de regiones diferencialmente metiladas asociadas a la acumulación de frío durante la dormancia en yemas florales de cerezo (Prunus avium L.)

Abstract

El cerezo dulce (Prunus avium L.) así como otras especies frutales de clima templado, pasan por un proceso conocido como dormancia durante otoño e invierno, para poder enfrentar factores ambientales adversos. Durante la dormancia las yemas florales deben acumular una cierta cantidad de horas frío (“chilling hours” = CH; horas <7,2ºC), para posteriormente florecer en primavera. Este requerimiento de frío depende directamente del genotipo y podría estar asociado a cambios en el nivel de metilación del ADN. Los cambios en el nivel de metilación en un locus pueden provocar cambios en su expresión, por lo que el estudio de regiones diferencialmente metiladas (del inglés “Differentially Methylated Regions”, DMRs) se hace fundamental para conocer cómo se regularía la dormancia a nivel molecular. En el presente estudio, se analizó la presencia de hipermetilaciones en regiones del genoma durante la acumulación de frío (0, 173, 348 y 516 CH) de yemas florales de la variedad de bajo requerimiento ‘Royal Dawn’. En primer lugar, se buscó obtener por medio de secuenciación con bisulfito de sodio utilizando secuenciación por síntesis con terminadores (Sanger), el estado de metilación de regiones con niveles de metilación conocidos (controles) .A partir de estos datos, se validó el estado de metilación de un retrotransposón como control positivo, el cual se encuentra constantemente metilado. Por otro lado, también se validó un gen asociado al citoesqueleto, el que posee bajos niveles de metilación. Posteriormente, se estudió el perfil de metilación de DMRs candidatas por medio de secuenciación masiva de amplicones. Finalmente, de cuatro DMRs estudiadas, DMR8 y DMR27 presentaron un aumento en su nivel de metilación (hipermetilación), las que podrían estar relacionadas con el proceso de dormancia o la acumulación de frío en cerezo.