Tese
Biodiversidade de bactérias endofíticas em malpighia emarginata e avaliação de isolados com potencial biotecnológico
Autor
Specian, Vânia
Institución
Resumen
Orientador: Prof. Dr. João Alencar Pamphile Tese (doutorado em Biologia Comparada)--Universidade Estadual de Maringá, Centro de Ciências Biológicas, 2014 Resumo: A Malpighia emarginata, conhecida popularmente como acerola, foi introduzida no Brasil na década de 1950. É uma espécie arbustiva que se desenvolve em zonas de clima tropical e subtropical, conhecida por sua resistência e rusticidade, além de ser muito atrativa devido ao teor de vitamina C encontrado em seus frutos, que podem ser consumidos in natura ou na forma de sucos e geleias. Os microrganismos endofíticos têm sido isolados de todas as espécies vegetais estudadas e apresentam potencial biotecnológico no controle de patógenos, promoção de crescimento e produção de metabólitos secundários, além da produção de diversas enzimas. As bactérias endofíticas vivem em simbiose com a planta, transitando entre estágios de colonização epifítica e endofítica, e dessa forma podem oferecer benefícios ecológicos ao vegetal ou mesmo ter um efeito neutro. Para que seja garantida a eficiência do controle biológico é necessário conhecer a ecologia do patógeno e do antagonista. As bactérias endofíticas apresentam alto potencial para controle de fitopatógenos, em virtude de sua competição por espaços e nutrientes no interior da planta. Os endófitos, além de apresentarem elevada capacidade para a produção de diversas enzimas, com inúmeras propriedades e aplicações biotecnológicas, também podem ser usados em outras áreas de interesse como na solubilização de fosfato. Para estudar a diversidade de bactérias endofíticas é utilizado o sequenciamento do gene 16S rDNA, que, aliado a técnica de PCR, se tornou um padrão universal na identificação e classificação bacteriana. Dessa forma, os objetivos desse trabalho foram o de estudar a diversidade de bactérias endofíticas presentes em M. emarginata e analisar o potencial biotecnológico desses isolados na solubilização de fosfato inorgânico, no controle biológico de fitopatógenos e também a produção in vitro de enzimas extracelulares. Pelo sequenciamento da região 16S foi possível identificar 36,94% dos isolados, distribuídos nos seguintes gêneros: Acinetobacter, Aureimonas, Bacillus, Cellulomonas, Enterobacter, Microbacterium, Micrococcus, Pseudomonas e Staphylococcus, sendo mais de 30% destes, foram identificados em nível de espécie. Na avaliação da solubilização de fosfato, 17,64% das bactérias apresentaram resultado positivo. Muitos isolados também foram capazes de inibir o crescimento de fitopatógenos em até 89,09%. Os halos produzidos na atividade enzimática chegaram a 4,80. Esses estudos comprovaram a diversidade genética existente na comunidade endofítica de M. emarginata, e demonstra o potencial biotecnológico de alguns isolados, na solubilização de fosfato, no controle biológico e na produção de enzimas de interesse comercial Abstract: The Malpighia emarginata, popularly known as "acerola", was introduced in Brazil in the 1950s. It is a shrub that grows in areas with tropical and subtropical climate, known for its resistance and rusticity, besides being very attractive due to the vitamin C found in its fruit, which can be consumed in natura or as juices and jellies. The endophytic microorganisms have been isolated from all plant species studied and have biotechnological potential for the control of pathogens, growth promotion, production of secondary metabolites and several enzymes. Endophytic bacteria live in symbiosis with the plant and move between stages of epiphytic and endophytic colonization, and thus can provide ecological benefits to the plant or even have a neutral effect. To ensure the efficiency of the biological control is necessary to know the ecology of the pathogen and the antagonist. Endophytic bacteria have a high potential to control pathogens, due to their competition for space and nutrients in the interior of the plant. The endophytes have high capacity for the production of several enzymes with numerous properties and biotechnological applications, and also can be used in other interesting areas, as phosphate solubilization. The sequencing of 16S rDNA gene, combined with PCR technique, became a universal standard for bacterial identification and classification, being used to study the diversity of endophytic bacteria. Therefore, the objectives of this work were to study the diversity of endophytic bacteria present in M. emarginata and analyze their biotechnological potential for the solubilization of inorganic phosphate, the biological control of plant pathogens and the in vitro production of extracellular enzymes. It was possible to identify 36.94% of the isolates by sequencing of 16S, distributed in the following genera: Acinetobacter, Aureimonas, Bacillus, Cellulomonas, Enterobacter, Microbacterium, Micrococcus, Pseudomonas and Staphylococcus; more than 30% were identified to the species level. Regarding the evaluation of the phosphate solubilization, 17.64% of bacteria were positive. Many isolates were also able to inhibit up to 89.09% the pathogens growth The halos produced in the enzyme activity reached up to 4.80. This study demonstrated the existence of genetic diversity in the endophytic community of M. emarginata and the biotechnological potential of some isolates for the phosphate solubilization, biological control and the production of enzymes of commercial interest