Dissertação
Avaliação da produção de celulases por duas linhagens de leveduras isoladas de frutos de palmeiras
Registro en:
SANTOS, Laisy Daniella Alves. Avaliação da produção de celulases por duas linhagens de leveduras isoladas de frutos de palmeiras.2017.51f. Dissertação (Mestrado em Agroenergia) – Universidade Federal do Tocantins, Programa de Pós-Graduação em Agroenergia, Palmas, 2017.
Autor
Santos, Laisy Daniella Alves
Institución
Resumen
The demand for industrial consumption of cellulases has increased due to its use in several
sectors of supply.
In this sense, the search for alternatives that potentiate the production of cellulases is of
paramount importance, given the variety of sources available. The objective of this work was
to quantify the cellulases produced by two strains of yeast, besides evaluating the effect of the
addition of onosaccharides and disaccharides in the culture means the production of the
enzymes and to partially characterize the brute enzymatic extract. Cellulase production was
done in culture submerged in five means containing 5 g.L-1 of carboxymethylcellulose (CMC),
arabinose, cellobiose, glucose and / or lactose.The tests were conducted at 40 ° C at 150 rpm
for 96 hours. In the means with CMC the highest cellulase activity for the T194 lineage was
0.056 U. mL-1 for CMCase, 0.063 U. mL-1 for FPase and 0.096 U. mL-1 for exoglucanase. With
the increase of the inducers, the maximum activity values obtained were 0.632 U. mL-1 for
CMCase in the means with arabinose, 0.646 U. mL-1 for FPase in the means with arabinose and
0.604 U. mL-1 for exoglucanase, all in the means with arabinose. For the I1236 line in the CMC
means the highest cellulase activity was 0.023 U. mL -1 for CMCase, 0.010 U. mL -1 for FPase
and 0.003 U. mL -1 for exoglucanase. For the I1236 line in the CMC medium the highest
cellulase activity was 0.023 U. mL -1 for CMCase, 0.010 U. mL -1 for FPase and 0.003 U. mL -
1 for exoglucanase. With the addition of inducers, the maximum activity values obtained were
0.619 U. mL-1 for CMCase, 0.514 U. mL-1 for FPase and 0.427 U. mL-1 exoglucanase, all in the
medium with arabinose. The partial characterization of the brute enzyme produced by both
strains showed significant influence of pH and temperature for FPase and Avicellase and for
I1236 only the CMCase activity had no significant difference. The optimum pH range was 5 to
6 for the T194 line and 4 to 6 for the I1236 line and the optimum temperature range was 50 to
58ºC for both lineages for the three enzymes studied. The cellulases produced by the T194 line
presented stabilities higher than 70% in the pH range between 7 and 8 and above 80% in the
temperature range between 45 and 58ºC. For the cellulases produced by strain I1236 there was
stability around 65% for Avicelase and 80% for CMCase and FPase at pH 6 and the thermal
stability was higher than 80% between 55 and 65ºC for the three enzymes studied. A demanda pelo consumo industrial das celulases tem aumentado em função do seu uso em
diversos setores de suprimento, como setor alimentício, farmacêutico e usinas de álcool. Neste
sentido, a busca por alternativas que potencializam a produção de celulases é de suma
importância, tendo em vista a variedade de fontes disponíveis. O objetivo deste trabalho foi
quantificar as celulases produzidas por duas linhagens de leveduras, além de avaliar o efeito da
adição de monossacarídeos e dissacarídeos no meio de cultivo para a produção das enzimas e
caracterizar parcialmente o extrato bruto enzimático. A produção das celulases foi feita em
cultivo submerso em cinco meios contendo 5 g.L-1 de carboximetilcelulose (CMC), arabinose,
celobiose, glicose e/ou lactose. Os ensaios foram conduzidos a 40ºC a 150 rpm durante 96
horas. No meio com CMC a maior atividade celulásica para a linhagem T194 foi de 0,056 U.
mL-1 para CMCase, 0,063 U. mL-1 para FPase e 0,096 U. mL-1 para exoglucanase. Com o
acréscimo dos indutores os valores máximos de atividades obtidos foram de 0,632 U. mL-1 para
CMCase, 0,646 U. mL-1 para FPase e 0,604 U. mL-1 para exoglucanase no meio com arabinose.
Para a linhagem I1236 no meio com CMC a maior atividade celulásica foi de 0,023 U. mL-
1para CMCase, 0,010 U. mL-1 para FPase e 0,003 U. mL-1 para exoglucanase. Com a adição de
indutores os valores máximos de atividades obtidos foram de 0,619 U. mL-1para CMCase, 0,514
U. mL-1 para FPase e 0,427 U. mL-1 exoglucanase, todos no meio com arabinose. A
caracterização parcial da enzima bruta produzida por ambas as linhagens mostrou influência
significativa do pH e da temperatura para FPase e Avicelase, mas não para a linhagem I1236.
A faixa de pH ótimo encontrada foi de 5 a 6 para a linhagem T194 e de 4 a 6 para a linhagem
I1236 e a faixa de temperatura ótima foi de 50 a 58ºC para ambas as linhagens para as três
enzimas estudadas. As celulases produzidas pela linhagem T194 apresentaram estabilidades
superior a 70% na faixa de pH entre 7 e 8 e acima de 80% na faixa de temperatura entre 45 a
58ºC. Para as celulases produzidas pela linhagem I1236 houve estabilidade em torno de 65%
para a Avicelase e 80% para CMCase e FPase em pH 6 e a estabilidade térmica foi superior a
80% entre 55 e 65ºC para as três enzimas estudadas.