Dissertation
Expressão gênica de citocinas em felinos (Felis catus) infectados e não infectados pelo herpesvírusfelino tipo 1.
Registro en:
CDD 636.089
Autor
ANDRADE, Lucélia Martins de
Institución
Resumen
Os objetivos deste estudo foram investigar a prevalência do Herpesvírus felino tipo 1 (FeHV-1) em gatos domésticos e associar as expressões gênicas das citocinas: TNF-α, IL-6, IL1-β, IFN-α, IFN-β, IFN-γ em animais positivos e negativos a este vírus. Métodos O estudo foi realizado com gatos domésticos atendidos em clinicas e abrigos da região Metropolitana de Belém. Amostras de swabs conjuntivais foram coletadas nesses animais e submetidas à extração do ácido desoxirribonucleico (DNA), essas amostras foram avaliadas usando a técnica de PCR convencional, a fim de identificar a infecção por FeHV-1. Amostras de sangue também foram
coletadas e submetidas à extração do ácido ribonucleico (RNA) para avaliação da expressão gênica das citocinas que foi feita pela técnica de RT-PCR. O gene Gliceraldeído-3-fosfato desidrogenase (GAPDH) foi utilizado como gene endógeno. A expressão de cada gene foi determinada pelo método 2-∆Ct. Os perfis de expressões gênicas foram testados quanto a normalidade pelo teste de Kolmogorov-Smirnov. E o teste t de Student foi aplicado para diferenciar os níveis de expressões dessas citocinas entre animais positivos e negativos ao FeHV-1 através do programa SAS (Free Version University Edition). O nível de significância
foi p <0,05. Resultados Cinquenta e cinco gatos foram incluídos no estudo e nove (16%) gatos foram positivos para a infecção pelo FeHV-1. Os genes TNF-α e a IL-6 demonstraram significância (p<0,05), sendo que o gene TNF-α expressou 2x mais os negativos e o gene IL-6 expressou 2x mais os positivos. As citocinas IL-1β, IFN-α e IFN-b não apresentaram significância (p>0,05). Conclusões e relevância A análise de RT-PCR na avaliação dos perfis de expressão gênica de citocinas em gatos positivos e negativos ao herpesvírus felino pode ser
usada para avaliar o estado imunológico, pois sugere o estágio de infecção desses animais. The objectives of this study were to investigate the prevalence of FeHV-1 in domestic cats and to associate the cytokine gene expressions: TNF-α, IL-6, IL1-β, IFN-α, IFNβ, IFN-γ in positive animals and negative to this virus. Methods The study was carried out with domestic cats from veterinary clinics and shelters in the metropolitan region of Belém. Samples of conjunctival swabs were collected in these animals and subjected to deoxyribonucleic acid (DNA) extraction, these samples were evaluated using the conventional PCR technique, the in order to identify FeHV-1 infection. Blood samples were also collected and submitted to ribonucleic acid (RNA) extraction to evaluate the cytokine gene expression that was performed by the RT-PCR technique. The Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) gene was used as an endogenous gene. The expression of each gene was determined by the 2-∆Ct method. Gene expression profiles were tested for normality using the Kolmogorov-Smirnov test. And the student t test was applied to differentiate the levels of expression of these cytokines between FeHV-1 positive and negative animals through the SAS program (Free Version University Edition). The level of significance was p <0.05. Results Forty cats were included in
the study and six (15%) cats were positive. The TNF-α and IL-6 genes showed significance (p<0.05), with the TNF-α gene expressing 2x more negatives and the IL-6 gene expressing 2xmore positives. Conclusions and relevance The analysis of RT-PCR in the evaluation of gene expression profiles of cytokines in cats positive and negative for feline herpesvirus can be used to assess the immune status, as it suggests the stage of infection of these animals.