Os microrganismos vêm sendo intensamente estudados para aquisição de metabólitos com atividades antimicrobianas e, com o aumento de infecções causadas por microrganismos multirresistentes, a pesquisa para aquisição ou seleção de novas moléculas bioativas se torna imprescindível. Os fungos vêm recebendo destaque nesse grupo desde a descoberta da penicilina derivada do fungo Penicillium chrysogenum. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi isolar fungos presentes no solo da região de Brasília-DF com atividade antibacteriana. A partir dos testes preliminares de antibiose em placa foram selecionados dois isolados de fungos com provável capacidade antimicrobiana. Os fungos foram identificados por meio de características microscópicas, macroscópicas e pela amplificação da região intergênica transcrita (ITS). Os dois isolados foram identificados como Penicillium citrinum com identidade de 100% quando alinhadas com sequências do banco de dados Genbank. Ambos os P. citrinum foram cultivados sob fermentação em estado líquido, em seguida separada a parte líquida da parte celular, a parte líquida foi liofilizada e seus extratos foram testados pelo método de microdiluição em caldo “US National Committee for Clinical Laboratory Standards” (NCCLS), contra as bactérias Gram positivas S. aureus ATCC 25923, E. faecalis ATCC 29212, Gram negativas K. pneumoniae ATCC 13883 e E. coli ATCC 8730, onde foi alcançada a capacidade de inibir em até 100% todas as bactérias testadas, quando confrontada contra o filtrado 2. Os resultados confirmam o potencial antimicrobiano apresentado pelos fungos que foram isolados do solo, existindo a possibilidade em isolar metabólitos antibacterianos a partir desses fungos estudados.